2420型fame全自动酶免分析工作表及洗涤模式的优化设计.docxVIP

2420型fame全自动酶免分析工作表及洗涤模式的优化设计 自动酶免费分析仪可以自动完成酶联合免疫吸附试验（elisa），包括稀释、添加样品、试剂分配、保温、清洁和阅读板的步骤，从而有效提高elisa考试的精度和准确性。但在常规应用中,由于上机检测受试剂位和孵育位的限制,致使多项目组合检测效率降低,不能满足临床标本快速检测的需求[2.31。为此,笔者对FAME全自动酶免分析仪原常规实验方案进行了优化和重排,并对重组后的实验方案进行了实验评估,证实优化后的实验方案缩短了检测全程时间,提高了检测效率。现将优化的实验方案介绍如下。 1 材料和方法 1.1 fame公司的软件介绍 24/20型FAME全自动酶免分析仪(瑞士HAMILTON公司).操作软件为Microlab STAR 3.2英文版,FAME 2.2中文版和AusLab 2.5酶标实验室管理系统以及南方惠侨检验信息系统。 1.2 elisa试验剂盒 乙型肝炎5项血清标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb) ELISA试剂盒(中山生物有限公司),质控血清由卫生部临床检验中心提供,批号0803。 1.3 标准物质 所有检测样本均为广州中医药大学第一附属医院患者的血清标本。 1.4 实验方法interpersonal 严格按HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb五项血清学标志物(简称乙肝5项)检测试剂盒说明书在FA M E2.2软件上编制实验参数。标本经过条码扫描装载,STAR前处理加样后;微板转入FAME自动酶标仪,通过加试剂、温育、洗板、显色和终止比色后,酶标结果使用AusLab2.5程序判读并发送到南方惠侨LIS系统自动与患者资料整合。 2 结果 2.1 麻黄血清标志物单次使用表 根据我室的工作量设计出一套90～360份标本的大容量的工作表,见表1。为方便表述将乙型肝炎5项血清标志物依次用sg、sb、eg、cb表示。该工作表适用于标本量在360份之内的工作量,工作表经模拟后表现出较完美的阶梯式的运行图。 2.2 洗涤剂对hbsag的影响 选择临床标本400份(其中200份HBsAg阳性标本,S/C01.01～25.6)及HBsAg浓度0.5ng/ml的临界值血清。固定孵育温度(37±1)℃,时间(30±2) min,显色时间10 min,主波长450 nm和参比波长620 nm比色。泵动力高注低吸,浸泡时间2 s,吸液高度0.1 mm,洗涤高度距微孔底部3.0 mm等参数不变,分别采用不同洗涤模式进行洗涤,检测HBsAg。结果显示,模式四(340μI底部洗板,洗板次数4次,底部扫洗体积200μI,连续洗涤体积300μI)敏感度、特异度和准确性最高(见表2)。 2.3 灵敏度和重复性 取HBsAg不同浓度的自制定值混合血清(用时间分辨法定值)采用模式四分别测定20次,通过计算其S/CO、S及变异系数(CV),并与手工法进行比较来验证方法的灵敏度和重复性,见表3。采用优化后的洗涤模式后,检测不同浓度的HBsAg质控血清的S/CO均值略高于手工法,且CV值均低于手工法,但无统计学差异(P0.05)。 3 全自动酶免分析的优缺点 ELISA是一种具有高灵敏度、高特异性的方法,被广泛应用,但影响因素较多,如反应温度、温育时间、实验条件等。手工检测往往难以控制,致检测不精密度增大。全自动酶免分析加样、洗板、温育、加注试剂、反应时间管理、结果判读直至发布整个过程全部由计算机完成,实验条件稳定一致,避免了手工干预等不确定因素的影响,大大提高了检测精密度水平。结合标本条码管理,全自动酶免分析避免了检验人员手工加样易出现的漏加、错加样本,试剂以及加样精度不够,实验条件不易控制而导致的差错和误差,确保了检测结果的准确度和可信度。多项实验结果显示,全自动酶免分析完全能满足ELISA试剂盒所规定的对样本检出的特异性和灵敏度要求,。 在全自动酶免疫分析系统分析中,采用不同的工作表和工作模式的设计会带来不同的工作效率和质量,所以要在实践中不断摸索和优化,寻求一种最佳的模式使仪器发挥最大的效率。按本工作表操作,使得360份标本乙型肝炎5项血清标志物的检测可以在3.5 h左右发出报告,较手工操作缩短了时间,提高了工作效率。而优化后的洗涤模式经标准品的验证,与手工操作相比S/CO略有所提高,CV略低于手工法,虽然无统计学差异,但从数值直观上看说明全自动酶免疫分析灵敏度和重复性还是优于手工法,因此采用此洗涤模式使结果更加稳定可靠。 当然,用哪一种模式进行检测,应按实验室本身的实际情况出发,不同的实验室有不同的实际情况,但前提是保证实验结果的准确性必须一致。为了提高工作效率和经济效益,应根据实际情况让检验仪器发挥最大的效率。