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elisa检测hbsag最佳洗板次数和方式的探讨 elisa法相对简单。目前，hbsag是一种制造试剂的生产工艺，在实际工作中洗板的数量较少，这容易导致假阳性率和样品的高复率，这增加了试验人员的工作量和心理压力。作者讨论了洗板的数量和方法，并报告如下。 1 材料和方法 1.1 入院时间,性别分布 50例HBsAg标本来源于本院2009-11-2010-02门诊体检血清标本, 其中男28例, 女22例, 年龄17～43岁, 平均30岁。 1.2 试剂和设备 HBsAg诊断试剂盒, 北京万泰生物药业有限公司;芬兰产酶标仪和洗板机。 1.3 方法 1.3.1 吸水纸空白 手工法:从37 ℃水浴温箱中拿出温浴好的反应板, 按试剂说明书配制洗液, 每孔注300 μl洗液, 浸泡30 s, 洗涤7次, 每次甩干孔内液体, 最后用干净吸水纸包裹后用力拍干。洗板机法:按试剂说明书配制洗液, 并严格操作, 用洗板机洗板7次, 每次浸泡30 s, 取出、拍干。 1.3.2 虚弱阳性的排除方法 用实时荧光定量PCR检测。50例HBsAg阴性标本, PCR检测的结果全部阴性。 1.4 统计处理 数据分析使用SPSS 11.5统计软件处理。 2 结果 2.1 清洁时间对elisa检测hbsag结果的影响 假阳性随着洗板次数的增加而降低, 洗板7次假阳性率最低, 见表1。 2.2 洗护板法对elisa检测hbsag结果的影响 见表2。 3 tween20洗板方法 ELISA试验因其操作简单、灵敏度高、特异性好、经济等特点而在临床上广泛应用, 但是由于其操作步骤复杂, 一般包括试剂准备, 样本收集, 加样, 温育, 洗涤, 显色, 比色, 结果判定等, 其中任何一项操作不当都会对检测结果产生很大影响, 其中洗板是实验成功的关键因素之一。洗涤是ELISA不同于均相免疫学检测技术的一大特征, 其目的是去除反应体系中与反应无关的成分, 包括未结合的酶结合物以及反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。洗涤液Tween 20是一种非离子去垢剂, 既含亲水基团, 又含疏水基团。以0.05%的吐温20, 洗涤效果较好, 有减少非特异性吸附和增强抗原抗体结合的作用。 洗板方法分手工和机器洗板, 一般认为机器洗板较手工洗板效果好, 关键是洗板次数的选择, 洗板次数过多, 浸泡时间过长, 用力冲洗过猛等容易把结合在孔底的抗原抗体复合物脱落而出现假阴性;洗板次数太少, 残留在微孔板上的酶标抗体的酶会使后加的无色底物变成有色产物, 产生非特异性反应而出现假阳性。从表1可以看出, 假阳性随着洗板次数的增加而降低, 采取完全机洗的方式在洗板6次后仍然存在假阳性 (2.0%) , 用机洗方式洗板7次能达到理想的洗板效果, 能够有效地避免假阳性的发生。 在洗板方式中, 手工洗板, 使用配制的洗涤液, 注意注入液体的量、浸泡时间、振荡时间等因素;采取机洗的方式, 其结果的一致性好, 但机洗易发生堵孔且平时要保养仪器, 两种方式差异无统计学意义。手工洗板一是对基层没有洗板机的医院;二是对于标本量少的医院可选择手工洗板。