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elisa试验影响因素分析 全标准免疫分析系统应用于临床实践，不仅降低了主观因素的误差，而且降低了操作员的工作量，缩短了整个检测时间。ELISA试验的影响因素多, 包括试剂、仪器、加样、孵育温度、洗板、显色、读值等, 我们主要探讨加样针的携带污染、洗板方式的选择、反应板的进板等待时间对结果的影响。 1 材料和方法 1.1 ng/ml (1) 临界值血清:29份, 浓度为1.0ng/ml, 由卫生部临床检验中心提供。 (2) 高值及阴性质控血清:各29份, 四川省临床检验中心提供。 1.2 病例标本方法 HBsAgS/CO值25.0-28.0的病人标本6份;HBsAgS/CO值1.0-6.0的病人标本6份:HBsAgS/CO值1.0的病人标本6份。 1.3 试剂 HBsAg试剂盒, 北京万泰生物药业有限公司生产, 符合国家标准。 1.4 仪器 2 结果 2.1 血清阴阳性结果 三块HBsAg反应板, 第一块板第一排分别加入HBsAgS/CO值25.0-28.0的病人样本6份, 高值质控血清6份;第二块板第一排分别加入HBsAgS/CO值1.0-6.0的病人样本6份, 浓度为1.0ng/ml临界值血清6份;第三块板第一排分别加入HBsAgS/CO值1.0的病人样本6份, 阴性质控血清6份。以上三块板第二、三、四、五排均以DH2O为样本, 加样针加完第一排样本后, 自动清洗10次, 再加第二排样本, 依此类推, 加完五排样本, 结果见表1, 表2。 根据试剂盒说明书判断阴阳性结果。表1可见, 第一、二、三排全部为HBsAg阳性, 第四排中有4个孔判为阳性, 第五排全部判为阴性。 表2可见, 第二排中有10个孔判为阳性, 第三排、四排、五排全部判为阴性。第三块板HBsAgS/CO值1.0的病人样本6份, 阴性质控血清6份, 其测定结果五排均为阴性。 2.2 连续洗板方式底部扫洗方式的血清检测结果 比较连续洗板、底部扫洗、单独的两点吸液的洗板方式。用HBsAg高值、阴性值、临界值质控血清各29份, 测定HB-sAg, 结果见表3。 从表3可见, 用连续洗板方式, 其高值、临界值、阴性质控血清结果符合率分别为100%、100%、96.6%;用底部扫洗方式, 其高值, 临界值, 阴性质控血清结果符合率分别为62.1%, 3.4%, 100%。连续洗板方式底部扫洗方式对高值临界值质控血清检测结果进行χ2检验, P0.05, 结果有显著性差异。用单独洗板方式, 其高值, 临界值, 阴性质控血清符合率分别为100%, 100%, 89.6%。 2.3 全面酶免疫分析系统的输入时间 设计是每3分钟进一块板, 当反应板数量少, 进板等待时间短。如果反应板数量多, 结果将造成第一块板和最末一块板的进板时间相差很大。 3 elisa试验条件设置及洗板设置 ELISA是具有高度特异性、灵敏度、简便快速便于自动化的免疫检测技术, 应用普遍, 过去常用手工加样、孵育、手工洗板、目测, 后来统一要求用酶标仪、洗板机, 但加样中容易出现漏加、误加, 加样速度慢, 前后孔的反应时间相差大, 造成错误结果而全自动酶联免疫分析系统的应用, 可以减少人为造成的误差, 提高试验结果的精确度和准确度。依赖于我们对仪器性能的了解, 正确合理地设置试验条件, 通过比较, 加样针清洗30遍再加样, 仍然存在弱阳性结果, 在我们所进行的ELISA试验中, 一针加多个样本是不允许的, 必须一个样本对应一颗针, 才能提高结果的准确性。 由于抗原抗体分子立体构型互相吻合使所带电荷相对应而发生互相吸引和结合;抗原抗体包被过程多采用物理吸附法, 所以洗板方式的选择对试验结果影响较大, 洗板冲击力过强, 洗板次数过多 (未按说明书要求) , 均可能导致符合率降低。故对不同的测定项目, 应摸索选择最佳的洗板方式。 加样后进板等待时间长, 其实是增加了试验的反应时间, 且长时间的使反应在室温下进行, 容易造成弱阳性样本的误检, 非一体化的仪器要考虑加样和进板的时间匹配, 才能提高试验结果的准确性。 瑞士澳斯邦全自动酶联免疫分析系统