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fame国外先进设备的研制 采集的血液的采样量大，客观上存在人为误差。因此，血液检测的标准化、规范化和自动化始终是血液检测的目标。为此,我中心先后购进STAR全自动加样器及FAME全自动酶免分析仪器各2台, 针对STAR全自动加样仪器和FAME全自动酶免分析仪器采用正交试验设计的方法,优化最佳试验参数,建立了具有我国特点的HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP四项免疫自动化检测系统,不仅实现了试剂国产化,而且提高了血站检验的整体检测水平。报告如下。 1 材料和方法 1.1 测试对象 郑州市无偿献血者所捐献的血液。 1.2 bsag和抗-hcvaa试剂盒 STAR全自动加样器和FAME全自动酶免分析系统(瑞士Hamilton公司);HBsAg 和抗-HCV EIA试剂盒(北京万泰和上海科华公司);抗-HIV EIA试剂盒(荷兰梅里埃和北京万泰公司);抗-TP EIA诊断试剂盒(北京吉比爱);340RT和HTⅢ酶标仪(奥地利Anthos公司);一次性针头(北京奥斯邦公司)。 1.3 投资前加样方法 初检:STAR加样器采用一次性加样针头加样,加抗-HIV(伯乐)、HBsAg 和抗-HCV (万泰),在340RT酶标仪上读板。复检:STAR加样器采用钢针加样针头加样,加抗-TP (吉比爱)、抗-HIV(万泰)、抗-HCV和HBsAg(科华),在HT3酶标仪上读板。STAR钢针有3组针循环冲洗使用(每组8个针),加抗-HCV稀释液和HBsAg酶是第1组针,加抗-TP工作液是第2组针,加样按2、3、1组进行轮换提针,加完4项阴阳对照需1、2、3组提针,加样顺序为:TP→HIV→HCV→HBV。如果有拖带污染:重新取小瓣进行复查确认。 2 结果 2.1 萃取参数的选择 2.1.1 稀释液时加样钢针分离技术的改进 当用STAR全自动加样器采用常规的液体模式加高粘稠度的稀释液时,加样钢针在分配液体过程中往下掉液体,为此,对常规的液体模式进行研究,优选出新的吸液分配液体模式,该模式可克服上述不足。见表1。 2.1.2 喷流式的设置 将“分配”图标拖到吸液命令下面的位置中,弹出对话框(见图1)。选择“ML_STAR”作为分配到目标板的序列。为通道选择及序列方式选择与吸液的设置。输入体积的量(Volume),选择分配模式“喷射排空”。将图1中的“Fix height from bottom”数字6按抗-TP、抗-HIV、抗-HCV、HBsAg依次改为 2、4、4、2 mm。然后单击图2中“Advanced”,出现图2的对话框。将图2中的“Liquid following during dispense ”中的“on”改为“off ”。 2.2 经过修正，检测了双孔样品的实验编程 2.2.1 样本配置 STAR的样本架是条形架,每架可排布32个样本,按照顺序先排布日常样本,再排布再检样本。 2.2.2 f列和g列计算无线网络关联的样本需要再检 对于再检样本,需要编辑Excel工作表,通过Excel工作表对再检样本进行编号,并编辑再检样本的再检项目及所需的体积,见图3。A列为再检样本的序号,B列、C列、D列和E列下为再检项目,其中“1”表示需要再检,“0” 表示不需要再检,F列和G列表示样本的体积,其中F2输入公式“=B2*50+C2*50+D2*10+E2*50”,采用相对引用的方式复制该公式至F列其他单元格。G2输入公式“=F2*2”,采用相对引用的方式复制该公式至G列其他单元格。如第1个样本需要再检的项目是抗-HIV,需要样本的体积单孔为50 μl,双孔为100 μl;第2个样本需要再检的项目是抗-TP,需要样本的体积单孔为50 μl,双孔为100 μl;第7个样本需要再检的项目是抗-HIV和抗-HCV,需要样本的体积单孔为60 μl,双孔为120 μl。 2.2.3 组成字符的加害 仪器操作软件自动打开再检Excel工作表,读取各个项目,组成字符串。依次读取抗-HIV、HBsAg、抗-TP、抗-HCV的再检样本数,并计算各个项目要做样本的总数(包括正常样品数和再检样品数),依此决定稀释液和酶的分配孔数。 2.2.4 初检和再检样品总起始位 “number”为正常样品的个数,“number_all”为正常样品和再检样品的总数。样品的起始位为132,终止位为133。正常样本数有单数和双数2种情况,那么再检样本的在酶标板定位就不同,1个mediate1,1个mediate2。 2.2.5 酶标板再检序列的分配 首先通过Excel工作表读取再检样本的体积,将液体分配到两个序列中。以抗-HIV为例,8个通道依次读取再检样本,确定分配体积,然后从再检样本序列ML_STAR samples_zj中吸取样品,并将样品分配到酶标板ML_STAR Targ