丹参对失血性休克再灌注大鼠肾损伤的保护作用.docxVIP

丹参对失血性休克再灌注大鼠肾损伤的保护作用 对缺血和再灌注也很敏感。再灌注（h-r）通常会导致肾脏再灌注损伤和急性肾功能衰竭。近年来,氧自由基在缺血再灌注损伤的发生中起重要作用已达成共识。本实验通过观察HS-R大鼠肾损伤时肾脏组织自由基的变化以及复方丹参注射液对HS-R大鼠肾脏损伤的治疗作用,探讨HS-R大鼠肾损伤的机制及丹参的治疗机制,以期为临床治疗休克提供实验依据。 1 材料和方法 1.1 复方有效克氏原螯虾sm组 雄性SD大鼠 30只,体重 260~310 g (温州医学院实验动物中心提供,医动字第220030002号 ),实验前禁食12 h,可自由饮水,随机分为正常对照组(NC组)、失血性休克再灌注组(HS-R组)和丹参治疗组(SM组,复方丹参注射液由上海第一生化药业公司生产,批号:020137),每组10只。各组动物腹腔注射25%乌拉坦 (5 mg/ 100g体重),麻醉后气管插管,保持气管通畅,左颈总动脉插管以放血用,右侧颈外静脉插管供注入药物及血液回输。HS-R组和SM组动物颈动脉放血至平均动脉压(MAP) 40 mmHg,维持 90 min后回输全部失血和等量无菌生理盐水(50滴/min),SM组按 8 g/kg体重在血液回输前1 min经颈静脉缓慢注入复方丹参注射液,HS-R组以等量生理盐水代替丹参。回输结束后2 h,取血测定肾功能,取肾组织测定自由基指标,并作病理学检测。 1.2 检测方法 1.2.1 肾功能测试 尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)在自动生化分析仪上测定。 1.2.2 抗氧化酶活性测定 取肾组织制备匀浆(按照南京建成生物工程研究所提供的组织匀浆制备方法),检测肾组织超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、黄嘌呤氧化酶(XOD)活性、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量,以上试剂盒均购自南京建成生物工程研究所,检测方法按说明书操作。 1.2.3 组织病理学检查 取肾组织,4%多聚甲醛中固定,石蜡包埋切片,HE染色后光镜下观察。 1.3 a分析的检验 组间比较用One-Way ANOVA分析后, 采用Student-Newman-Keuls检验,方差不齐时采用Levene test检验。 2 结果 2.1 血浆bun和cr值 HS-R组和SM组血浆BUN、Cr值与NC组比较,显著升高(P0.05),但SM组血浆BUN和Cr值均显著低于HS-R组(P0.05),见表1。 2.2 各组肾组织中da、mda和no含量的比较 与NC组相比较,HS-R组和SM组肾组织的SOD、GSH-PX活性显著下降,而XOD活性、MDA含量明显增高,HS-R组肾组织的NO含量明显增高;SM组的SOD活性比HS-R组明显增高,MDA和NO含量明显低于HS-R组,以上差异均有统计学意义。与HS-R组比较,SM组肾组织GSH-PX活性有增高趋势,XOD活性有下降趋势,但以上二个指标的差异没有统计学意义,见表2。 2.3 各组大鼠肝肾的组织病理学和组织学检查 光镜下可见,HS-R组大鼠肾组织病变明显,肾小球皱缩,肾小囊腔扩张,肾小管上皮细胞有不同程度的细胞变性,坏死和脱落,肾间质有大量炎细胞浸润,并出现水肿,SM组大鼠肾脏的病变明显轻于HS-R组。 3 复方丹参对失血性休克再灌注损伤肾组织抗氧化活性的作用 肾是一个高血流的器官,对缺血和再灌注均十分敏感,易出现失血性休克再灌注肾损伤(HS-RRI),甚至发展为再灌注肾功能衰竭。本研究发现,失血性休克补液治疗后2 h,大鼠的肾功能明显下降,肾脏出现严重的组织学病变。Glaumann等首先提出了肾缺血再灌注损伤(RIRI)的概念,包括2种类型:单纯型RIRI,如夹闭肾动脉引起的肾损伤;全身型RIRI,如休克后微循环再通引起的肾损伤,对前者的研究较多,后者受全身因素影响较大,对其研究较少。大多数学者认为脏器的缺血再灌注损伤机制包括自由基生成增多、细胞内钙超载及细胞粘附分子的作用等,其中对于自由基的作用研究得最为广泛。在缺血再灌注损伤过程中,可通过多种途径产生氧自由基,目前认为主要通过黄嘌呤氧化酶的形成增多、中性粒细胞的呼吸爆发、线粒体功能损伤和儿茶酚胺的自身氧化产生大量的氧自由基。自由基可与各种细胞成分,如膜磷脂、蛋白质、核酸等发生反应,造成细胞结构损伤和功能代谢障碍。 本研究表明,失血性休克再灌注2 h时,肾组织的SOD和GSH-PX活性显著下降,而XOD活性、MDA和NO含量明显增高。NO是一种潜在的舒血管物质,与肾缺血再灌注损伤的发生密切相关,肾脏基础水平的NO对维持其血流及肾小球滤过率具有重要作用。肾组织NO含量在再灌注后会明显增加,过量的NO会有损伤作用,因为再灌注后组织中大量产生的NO可与氧自由基产生迅速反应生成更具细胞毒性的自由基ONOO(过氧化亚