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比色法测定土壤腐殖质组分方法的比较研究 土壤有机质含量是土壤肥力的重要指标之一。土壤腐殖质是土壤有机质的主要组成部分。研究土壤腐殖质的组成及性质变化历来为人们所重视[1~4]。土壤腐殖质由胡敏酸、富里酸、胡敏素等组成,土壤腐殖质的分组测定常用0.1 mol/L焦磷酸钠和0.1 m o l/L氢氧化钠混合液提取腐植酸(胡敏酸+富里酸),在此条件下,能将土壤中的难溶于水和易溶于水的结合态的腐殖质络合成易溶于水的腐植酸钠盐,用酸将胡敏酸沉降出来,再将沉淀用氢氧化钠溶解成为胡敏酸钠盐[本文将碱溶出的腐殖质称“腐植酸”,其后用酸沉淀出的组分(黑腐酸+棕腐酸)称“胡敏酸”]。腐植酸、胡敏酸的有机碳量一般用重铬酸钾容量法测定。富里酸含量可由腐植酸含量减去胡敏酸含量计算。但重铬酸钾容量法测定腐植酸中有机碳量对温度、时间等氧化条件要求严格,操作繁琐,测定时间长,而且还会产生对环境有害的Cr6+污染。 土壤腐植酸为棕褐色,在一定的浓度范围内,腐植酸颜色深浅基本上与其含量成正相关。因此,可用分光光度法直接测定土壤腐植酸含量以及胡敏酸和富里酸的含量。采用比色法测定腐殖质组分,操作简便,实验步骤容易掌握,测定的灵敏度和准确度较高、干扰少,而且可以节约能源、时间并减少环境污染和消除实验中的安全隐患。尽管对腐植酸及其组分的研究已发展到采用现代技术分析腐植酸含量及组分的结构组成,但采用简单快速的手段研究腐殖质组分和改进测试方法,仍然是需要探索的内容。 本研究将腐殖质测定的比色分析结果与经典的重铬酸钾容量法测定结果加以比较,以期该比色测定方法能够推广,作为土壤腐殖质组分测试新方法的尝试。 1 材料和方法 1.1 样品的来源 供试土壤来源于中国农业科学院国家测土施肥中心实验室,黑土取自吉林和黑龙江,红壤取自湖南、湖北和江西,潮土取自河南和河北(共40个样品),土样风干过60目筛。 1.2 中和酸/中和碱计算 主要仪器:分光光度计、恒温震荡器、恒温箱、油浴锅。 主要试剂包括腐植酸提取剂:c(N a4P2O7)=0.1 m o l/L,c(N a O H)=0.1 m o l/L;中和酸:0.5 m o l/L H2S O4;中和碱:1.0 m o l/L Na OH;其他反应试剂:0.025 mol/L H2SO4溶液,0.05 mol/L Na OH溶液,0.20 mol/L Fe SO4溶液,0.4000 mol/L重铬酸钾溶液,邻啡琳指示剂,浓硫酸(比重1.84,分析纯)。 1.3 实验方法 1.3.1 胡敏酸、富里酸标准溶液的配制 实验选择有代表性的、有机质含量较高的土样提取腐植酸并作为分离富里酸、胡敏酸标准样品的材料。土样为黑土,取自黑龙江宝清县,土壤p H值5.9、有机质含量4.56%,用腐植酸提取剂(0.1 mol/L Na4P2O7+0.1 mol/L Na OH)提取腐植酸并分离得到富里酸、胡敏酸溶液,再用重铬酸钾氧化-容量法测定腐植酸、富里酸和胡敏酸的有机碳含量,根据制备的腐植酸、富里酸、胡敏酸标样的有机碳含量准确稀释分别得到标准系列。 (1)标准溶液的制备。 称量50 g土壤样品于500 m L三角瓶中,加入250 m L腐植酸提取剂,震荡1 h,在20~25℃室温静置过夜,虹吸瓶中上部清液于烧杯中,一份不分离作为腐植酸的标准溶液,转入塑料瓶中,放入温度小于5℃冰箱中保存。另一份加中和酸滴定至p H=3.0(p H计检验),记录所用中和酸体积,加盖密封,置于80℃恒温箱中保温30 min,静置过夜。用慢速滤纸过滤于烧杯中,在滤液中再加入与前所耗中和酸等体积的中和碱(加碱以利于富里酸溶液的保存),转入塑料瓶中,在温度小于5℃的冰箱中保存。此即作为富里酸的标准溶液。 将滤纸及其上残渣连同漏斗转入三角瓶上,用0.025 mol/L H2SO4洗涤至滤液无色,弃去滤液(目的是洗净滤纸及残渣上残留的富里酸溶液),将滤纸、残渣连同漏斗放到另一三角瓶上。以刚沸腾的0.05 mol/L Na OH溶液洗涤至滤液基本无色,冷却后储于塑料瓶中,放入温度小于5℃冰箱中保存。此即作为胡敏酸的标准溶液。 (2)胡敏酸、富里酸标准溶液浓度的标定。 分别取上述制备的腐植酸、富里酸和胡敏酸标液2~10 m L(视颜色深浅而定)于50 m L三角瓶中,调节酸度为中性。在60℃的恒温水浴中蒸干,然后加5 m L重铬酸钾溶液,再加入5 m L的浓硫酸(1.84 g/L),摇匀,加弯管漏斗做回流装置,同时做空白对照,在170~180℃的油浴中,溶液沸腾开始记时,5 min后取出,冷却后转入250 m L的三角瓶中,用0.2 mol/L Fe SO4滴定剩余的重铬酸钾溶液。求出腐植酸、富里酸和胡敏酸标液的浓度(有机碳量)。根据腐植酸、富里酸和胡敏酸标液的浓度再准确稀释配成如下标准系