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中枢神经轴突生长抑制因子研究进展 成年人神经损伤后的回收障碍一直是现代医学的难题。我过去认为，在损伤后，它无法再生。然而，经过近20年的研究和一系列神经恢复因素的发现，这一愿景被彻底打破。进一步阐明中枢神经再生抑制信号的传导机制, 并在损伤后早期阻断各种抑制因子的作用, 是近年来的研究热点。 1 轴突生长抑制因子 1.1 nogo-b突变株的分离和鉴定 Schwab等于1988年制备了针对髓鞘生长抑制蛋白的抗体——IN-1。2000年, 有3个研究小组报道克隆出了IN-1的抗原基因, 并将其命名为Nogo。Nogo编码三种蛋白, 分别为Nogo-A、Nogo-B、Nogo-C, 其中Nogo-A是唯一表达于少突胶质细胞的。因为对CNS再生有抑制作用的中枢髓鞘来源于少突胶质细胞, 所以有关Nogo-A的研究也最广泛。 Nogo-A主要表达于少突胶质细胞的内质网, 只有很少量表达于少突胶质细胞的表面, 在Schwann细胞和星形胶质细胞未见分布。它由1163个氨基酸组成, 在C末端有一个含双赖氨酸的内质网膜定位信号。目前已发现Nogo-A有两个轴突生长抑制区域:C端的Nogo-66 (这是三种Nogo共有的) , 近N端的NiG (具有Nogo-A特异性)。 关于Nogo-A的拓扑结构, 目前还不十分清楚。Grandpré等用Nogo-66的抗血清检测到它在细胞膜外的弱表达, 而Nogo的C端和N端经myc标记后却未能检测到, 这提示Nogo蛋白可能是一种C端和N端在细胞膜内, 而Nogo-66在细胞膜外的结构。但它在内质网的结构还不清楚。 2003年有3个研究小组分别报道用不同方法敲除了小鼠的Nogo基因, 观察其CNS损伤后轴突的再生情况, 但他们观察到的结果迥然不同。Kim组制作了Nogo-A/B突变小鼠, 只在9周内的小鼠观察到了明显的轴突再生;Zheng组制作了Nogo-A/B和Nogo-A/B/C两种突变小鼠, 两种小鼠都没有明显的轴突再生迹象;而Simonen组制作了Nogo-A突变小鼠, 出现了少突胶质细胞Nogo-B表达的增加, 再生轴突的数量却很少, 并且没有见到功能的恢复。因此人们提出:①Nogo-A确实是抑制成年CNS轴突再生的重要因素。②可能随着年龄的增长, CNS轴突的再生能力也下降。③可能还存在某些Nogo以外的抑制因子, 并且也随着年龄而增加。 1.2 抑制剂对cns轴突再生的抑制作用 除Nogo-A以外, 另两种髓磷脂相关蛋白——MAG (髓鞘相关糖蛋白) 和OMgp (少突胶质细胞髓磷脂糖蛋白) 也对损伤的CNS轴突再生具有抑制作用。近年还发现在CNS中另外一些成分如的Versican V2、Brevican和CSPG (硫酸软骨素蛋白多糖) 等也具有类似作用。 2 抑制信号向细胞的传导 前面所说的抑制因子都位于神经元胞外, 抑制信号必须传导到胞内才能发挥作用。 2.1 nogo-66 Fournier等应用碱性磷酸酶融合技术构建了一种AP-Nogo-66融合蛋白, 并以其为媒介在神经元轴突表面发现了一种含473个氨基酸残基的蛋白——NgR。早期胚胎神经元未有NgR表达, 并对Nogo-66无反应, 但转染了NgR后出现对Nogo-66的敏感性。因此NgR被认为是Nogo-66的初级介导者。以后又发现, MAG和OMgp也是通过NgR起作用, 所以认为NgR是三种髓磷脂相关蛋白的作用焦点。 NgR含有一个由420个氨基酸残基构成的外在信号序列和一个C末端的GPI (磷脂酰肌醇) 锚定位点, 但它缺乏细胞内片段, 所以其信号向胞内传导必定要借助其它跨膜分子。有人认为, NgR借GPI锚定于胞膜脂质层, 所以它和配基结合后可能是改变了与脂质层有关的胞膜内分子的信号。但目前为多数人认同的观点是, 存在某种跨膜分子, 与NgR共同作用, 将NgR接受到的来自髓磷脂的抑制信号传递到轴突胞质。 2.2 石髓蛋白的分布 P75是一种跨细胞膜的神经营养素受体, 其胞质部分与Rho作用, 而Rho已被证明能介导髓磷脂对轴突生长的抑制作用, 所以P75被认为是NgR的协同受体。Wang等截除P75的跨膜和胞内结构域, 与碱性磷酸酶融合形成融合蛋白P75-AP, 发现其仍然可以和全长的NgR结合, 说明P75NTR是通过其细胞外结构域和NgR相互作用。 虽然P75被认为在介导髓鞘抑制中起作用, 但还有一些问题不是很清楚:①已知P75在损伤脊髓的胶质细胞, 特别是少突胶质细胞中显著表达。但它是否在损伤的成年神经元显著表达, 目前还不清楚。②神经营养素/Trk和髓磷脂/NgR两个信号系统在P75的信号传导中的相互作用还不清楚。③因为P75在Schwann细胞的髓鞘形成中起重要作用, 所以它可能主要是介导髓鞘的再生而不是