nogo蛋白与中枢神经损伤修复机制.docxVIP

nogo蛋白与中枢神经损伤修复机制 中枢神经系统（cns）轴突再生的主要障碍之一是缺乏抑制再生的蛋白质。Nogo是目前已发现的三种重要的轴突再生抑制蛋白之一, 另外两种即髓磷脂相关糖蛋白 (myelin-associated glucoprotein, MAG) 和少突胶质髓磷脂糖蛋白。有关研究表明, 上述各种物质均通过一种糖基磷脂酰肌醇 ( glycosyl-phosphatidyl-inositol, GPI) 受体——Nogo受体 (NgR) 起作用, 进而提出了通过阻断NgR来促进神经元轴突再生的设想。 1 nogo蛋白的结构和生物学功能 1.1 nogo-a在n、n组织及安全性中的转录表达 有关Nogo蛋白的研究大多是2000年以后进行的。Chen和PrInjha以及Grandpre的课题组在2000年成功地克隆了Nogo基因, 其中Chen和PrInjha是用相关序列探针方法从大鼠cDNA文库中克隆得到, 而Grandpre等的研究工作都是在Schwab等研究相对分子质量为250kD的轴突生长抑制性蛋白NI-250 (即Nogo-A) 同源物肽段序列的基础上进行的。Nogo分子有A、B和C三个不同的异构体, 它们是同一Nogo基因 (在人类位于染色体2p13-14) 通过不同的启动子或RNA剪接方式形成的。Nogo-A、B和C在N端没有典型的分泌信号肽序列, 在C端有一共同的氨基酸序列, 其中有两个长的疏水序列形成跨膜区, 这一区域与主要定位于内质网的浆膜蛋白家族有很高的同源性。 大多数Nogo分子分布于内质网膜, 少数分布于细胞表面。在CNS, Nogo主要分布于白质中, 在髓鞘和培养的少突胶质中均可以检测到, 而Nogo-A主要存在于CNS髓磷脂和少突胶质中。 大鼠的Nogo-A转录体编码1163个氨基酸。Nogo-A的活性部位可能有两个:位于两个疏水区域之间的Nogo-66和N末端到第一个疏水结构域这部分肽链, 即N-Nogo。Nogo-A主要表达于CNS, 位于投射神经元和形成髓鞘的少突胶质中, 在胞膜、胞质和胞核中都存在。 曾有学者采用原位杂交方法发现了Nogo-A在人或大鼠体内的分布规律。第三军医大学叶剑等报道, 大鼠的大脑皮质、基底神经节、丘脑、下丘脑、延髓、脑桥、小脑、中脑、脊髓前后角及视神经中均有Nogo-A mRNA分布, 且主要位于胞浆;在脑、脊髓组织中呈散在分布, 脊髓腹侧2/3部分有强烈表达, 在背根神经节、自主神经节中也有较强活性, 而坐骨神经中则无Nogo-A表达。Huber等研究发现, Nogo-A在鼠胚神经组织中、海马、皮质的梨状细胞层、红核和动眼神经核中有明显的表达, 除CNS之外, 在其他组织系统如肌肉、睾丸和心脏也发现有表达。 Nogo-B与Nogo-A相比, 缺少了186~1004残基, 相当于大鼠的相对分子质量为35kD (NI-35) 的蛋白。而Nogo-C在相同位置缺少了相同数目的残基, 但N端更短, 故分子质量最小, 相当于以往描述的大鼠的VP20和foocen-s。 1.2 nogo-a和ngr在轴突生长过程中的作用 Nogo-A是在CNS外伤后具有轴突再生抑制作用的因子, 被称为髓鞘相关蛋白。它可以使生长锥溃变并抑制轴突生长, 针对Nogo-A的抗体在体外可以中和CNS髓鞘的大部分抑制活性。许多研究表明, Nogo-A和NgR在轴突生长的过程中就有表达;细胞核上免疫金标记的Nogo-A主要存在于染色体的核小体上, 表明其可能与基因转录有关;Nogo-A的表达与一些髓鞘形成有关的因子如α-微管蛋白、髓鞘基础蛋白的表达有密切联系, 这也暗示Nogo-A可能与髓鞘形成有关。通过进一步的研究阐明Nogo-A的功能是有必要的。 而Nogo-B的N末端可以促进内皮细胞的生长而抑制血管平滑肌的生长, 因此可以调节血管内环境稳定及血管重建。Nogo-C在体外也能导致背根神经节神经元生长锥溃变, 但由于二者分布较广, 其作用靶点可能不仅限于CNS中。 2 ngr的结构和生物学功能 2.1 x线晶体衍射 目前, 有关NgR的结构研究已经取得了一致的意见。即NgR属GPI锚定蛋白, 具有多个富含亮氨酸的重复结构。NgR由473个氨基酸残基组成, 从N端至C端包含1个信号肽、亮氨酸重复序列型N端 (LRRNT) 、8个亮氨酸重复序列 (LRR) 、富含半胱氨酸型C端延伸区 (LRRCT) 、特异性C末端以及1个GPI结构。X线晶体衍射提示NgR分子形似弯曲的香蕉, 有一个凹面与一个凸面, 长宽高大约为0.80nm×0.35nm×0.35nm, 含有少量的二级结构。分子凹面为平行的β片层, 凸面为一些连接β片层的环状结构。LRR结构域占据了NgR分子的大部分空间, 每一个亮氨酸重复序列