高效液相色谱法—高效液相色谱仪（食品仪器分析课件）.pptx

高效液相色谱仪; 高效液相色谱仪是实现液相色谱分析的仪器设备，自1967年问世以来，由于使用了高压输液泵、全多孔微粒填充柱以及高灵敏的检测器，实现了对样品的高速、高效和高灵敏的分离测定。;一、输液系统 贮液器 作用：提供足够数量的符合要求的流动相以完成分析任务。 要求（1）必须具有足够的容积； （2）脱气方便； （3）能耐一定的压力； （4）所用材质对所使用的溶剂都是惰性的。 注意（1）溶剂在放入贮液罐之前，必须经过滤膜过滤，以除去溶剂中的机械杂质； （2）溶剂在使用前必须脱气。;2. 高压输液泵 作用：将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱分离系统。 要求（1）能耐化学腐蚀； （2）能在高压下连续工作； （3）输出流量稳定，无脉冲，重复性高； （4）适用于梯度洗脱。 类型（1）恒压泵：输出无脉动，对检测器噪声低。但流速不够稳定。 （2）恒流泵：泵的内体积小，适于梯度洗脱。 ;3.过滤器 在高压输液泵的进口和它的出口与进样阀之间，应设置过滤器。 4.梯度洗脱装置 梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。;（1）根据梯度装置所能提供的流路个数分为：二元梯度、三元梯度等； （2）依据溶液混合的方式分为：高压梯度和低压梯度。 高压梯度，一般只用于二元梯度。精度很高，易于自动化控制。但必须使用两台高压输液泵，仪器价格昂贵，故障率亦相对较高。 低压梯度，只需一台高压输液泵，成本低廉，使用方便。;二、进样系统 进样器是将样品溶液准确送入色谱柱的装置，要求：密闭性好，死体积小，重复性好，进样引起色谱分离系统的压力和流量波动要小。 1.隔膜注射进样：使用微量注射器进样。 装置简单、死体积小。但进样量小且重现性差。;2.高压进样阀：目前最常用的为六通阀。 由于进样量可由定量管控制，因此进样准确，重复性好，如图。;3.自动进样器 由计算机自动控制定量阀，按预???编好的样品注射程序进行工作。取样、进样、复位、管路清洗等，可全部自动完成。 一次可完成几十个、上百个样品的分析。;三、分离系统 担负分离作用的色谱柱是色谱仪的心脏。通常要求色谱柱的柱效要高，选择性要好，分析速度要快。 常用分析柱的柱内径一般在2～5mm，也有用内径小于1mm的细柱，柱长一般在15～50cm。 用于半制备或制备目的的色谱柱内径一般在6mm以上。;色谱柱的维护;四、检测系统 1.作用 将柱流出物中样品组成和含量的变化转化为可供检测的信号，以完成定性、定量分析的任务。 2.分类 （1）通用型检测器 如折光指数（示差折光）检测器、电导检测器和蒸发光散射检测器等。 （2）专用型 如紫外检测器、荧光检测器、安培检测器等。;3. 对检测器的要求 （1）具有高灵敏度和可预测的响应，响应线性范围宽； （2）对样品中所有组分都有响应，适用范围广，响应速度快； （3）温度和流动相流速的变化对响应没有影响；;（4）响应与流动相的组成无关，可作梯度洗脱； （5）死体积小，不造成柱外谱带扩展； （6）使用方便、可靠、耐用、易清洗和维修； （7）不破坏样品组成； （8）能对被检测的峰提供定性和定量信息。;4.紫外检测器 紫外检测器是目前液相色谱中应用最广泛的检测器。在HPLC分析中，约有80%的物质可以在254 nm或280nm处产生紫外吸收。因此该类检测器应用很广，几乎所有的液相色谱装置中都配有紫外检测器。 紫外检测器实际上是一个紫外光度计，有分光（可变波长式）与不分光（固定波长式）两种。; 紫外检测器结构简单，应用范围光，具有很高的灵敏度，检测限可达10-9g/mL，此外，该检测器对温度和流速变化不敏感，可用于梯度洗提。 缺点在于：不适用于对紫外光完全不吸收的试样，且溶剂的选择受限制（对紫外光有吸收的溶剂不能使用）。;5.示差折光检测器; 示差折光检测器为通用型检测器，灵敏度为10-7g/mL。 其主要缺点是：对温度变化敏感，故检测器的控温精度应在±10-3℃。且该检测器不适于梯度洗提。 ;6. 光电二极管阵列检测器（PDA） 光电二极管阵列检测器一般认为是目前液相色谱最有发展、最好的检测器。 光电二极管阵列检测器，获得的检测信号是在全部紫外波段上的色谱信号。因此PDA得到的不是一般意义上的色谱图，而是具有三维空间的立体色谱光谱图。;波长;五、数据处理系统 记录仪、色谱数据处理机和色谱工作站