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草莓无病毒苗培养研究 经过几代人的繁殖，草莓容易感染各种病毒疾病，如草莓、草莓微红外病、草莓和侧柏病、草莓和侧柏病。叶片褶皱、果实变形、品质恶化、产量下降、植物生长缓慢等几种现象，并逐年恶化。针对这一难题,我们与美国农业部农业研究中心合作,建立了由组培试管苗繁育无病毒原种、生产用苗,到无病毒母株保存的完整繁育体系。 1 材料和方法 1.1 无病毒草莓品种 供试的早美光(Earliglow)、矮丰(Mohawk)、瑞星(Latestar)、奇妙(Demarvel)、北斗(Northeaster)和全明星(Allstar)6个无病毒草莓品种均由本所从美国直接引进。 1.2 方法 1.2.1 生物固养培养组织 在6月份取田间生长健壮的匍匐茎,用0.1%升汞消毒10分钟,然后在解剖镜下剥取茎尖分生组织0.3～0.4mm,立即置于生长培养基中培养。 1.2.2 培养基的生长 每隔4周取试管苗的丛生芽接种于增殖培养基上。增殖培养基的基本成分为MS无机盐,附加0.56mmol肌醇、1.2μmol盐酸硫胺素、1.32μmol 6-苄基嘌呤、87.6mmol蔗糖、6g/L琼脂,pH值5.6。培养基在121℃、131kPa的条件下灭菌20分钟。培养室的温度为25℃,光照强度为2000lx,光周期(光照/黑暗)为16/8小时。 在增殖培养基上生长3～4周后,取其培养物的新梢转移到生根培养基上。生根培养基为1/2MS,附加IBA 0.05μmol,培养两周后全部生根,将其移栽于温室条件下锻炼。 1.2.3 温室训练 生根的小植株打开瓶口锻炼两天后,移栽于河沙中,然后保存在温室中的塑料棚内,使其在较高的湿度下锻炼3周。 1.2.4 新叶的种植 经温室锻炼3周后的试管苗,地上部已全部长出新叶,地下部分生了大量新根,此时将其移于阳光直射的户外锻炼5天,然后直接移栽于大田。11月中旬扣小拱棚保温,试管苗可安全越冬。 2 结果分析 2.1 对主要病毒的脱除效果 6个供试品种匍匐茎的茎尖分生组织在培养基上成活后,按单个株系离体繁殖,然后将部分试管苗移栽于温室。经2～3个月试管苗长大后,采取小叶按小叶嫁接法嫁接于指示植物林丛草莓(Fragaria vesca)UC4、UC5、UC6和深红草莓(F.virginiana)UC10上,检查草莓斑驳病毒、草莓轻型黄边病毒、草莓皱缩病毒和草莓镶脉病毒等主要病毒的脱除情况,每株系每处理重复3～5次。试验证明,所有供试品种的病毒脱除率均在80%以上,经鉴定证明确系脱除病毒的株系保留,继而采用组织培养法扩繁。 2.2 病毒“原苗”的克隆率正在迅速增长 2.2.1 制备lg-ld-bb快速繁殖法 经指示植物UC4、UC5、UC6、UC10鉴定脱除所有病毒的株系,作为无病毒良种繁育体系的“原原种”,在培养室内进行无菌快速繁殖(图1)。在附加激素BA 0.5mg/L的MS培养基上,光照周期(光照/黑暗)16/8小时的条件下,早美光、矮丰、北斗、奇妙4个品种,每月可增殖16～19倍,全明星、瑞星可增殖8倍以上(表1),表明在增殖培养基上各品种的增殖倍数不同。同样,各品种的试管苗在增殖培养基上外观特征也不同,全明星、瑞星和早美光生长健壮,而矮丰、北斗生长势较弱。 2.2.2 苗苗移栽锻炼及成活率 把在增殖培养基上形成的丛生芽按单芽分开,转移到1/2 MS+IBA 0.05mg/L的生根培养基上,3周后诸品种的生根率均达100%。然后打开瓶口转移到阳光下锻炼3～4天,再移栽到温室培养基质(河沙、珍珠岩、蛭石等)中锻炼。温室的相对湿度应保持70%以上。生根的幼苗在16～20℃条件下成活率最高。表2表明,在无温度控制的温室条件下,在8～10月份移栽,以10月中旬移栽成活率最高,可达90%以上。夏季温度过高,周围环境湿度大,试管苗成活率大大降低。因此,试管苗移至温室锻炼以9月底至翌年4月为佳。此期移栽成活的试管苗(图2),可作为草莓无病毒栽培的“原原种”,直接向无病毒苗木繁育组织或农户提供,用来培育“原种”苗。 2.3 苗苗栽植、繁育 温室锻炼2～3周后的试管苗,待有新根和新叶长出时移出温室,在阳光直射下锻炼5～7天,然后直接移栽于大田的塑料大拱棚内,移栽成活率可达100%(表3),待试管苗长大、有匍匐茎长出时(图3),作为“原种”苗保存于防蚜虫网室内,作为无病毒核心母株,或直接提供给育苗者进行繁育(时间为当年11月至翌年3月上旬)。 2.4 人工养殖苗种的繁殖与管理 在塑料大拱棚内充分长大的无病毒试管苗,春季(3月上旬)进一步移栽稀植(30cm×40cm)。此期要加强土肥水管理,加快繁殖,同时要注意与产区隔离,并及时防治蚜虫,以防止病毒再次感染。待5月至6月上旬,即可作为无病毒种苗直接提供给种植者,用来繁殖健壮的生产用苗,以便9月份进行大规模