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甘薯病毒病的症状识别与检测方法 甘薯病毒病是甘薯的一个重要疾病。由于甘薯是一种无性繁殖植物，一旦感染病毒，甘薯种子将继续传播、积累和代代相传，从而加剧疾病的程度，严重降低甘薯产量。利用茎尖分生组织培养培育脱毒甘薯是防治病毒病,提高甘薯产量和质量的首选方法。目前,脱毒甘薯已开始在我省较大面积推广。由于不同级别的脱毒种薯在繁育过程中都有可能感染病毒,为了便于繁种者及时识别并淘汰感病种薯,就几种常用的病毒检测方法作一简要介绍。 1 检测甘薯病的常用方法 1.1 重组薯块病症状 目测法是根据甘薯叶片和薯块上出现的典型症状判断甘薯是否感染病毒。甘薯病毒病的症状主要包括:(1)叶斑型。主要有紫色羽状斑、紫斑、紫环斑、黄色斑或者枯斑。(2)花叶型。苗期感病后,初期叶脉呈网状透明,后沿叶脉出现不规则黄绿相间的花叶斑纹。(3)卷叶型。叶片边缘上卷,严重者可形成杯状。(4)叶片皱缩型。病苗叶片较小,皱缩,叶缘不整齐,甚至扭曲畸形。(5)叶片黄化型。包括叶片黄化及网状黄脉。薯块上的症状主要是产生黑褐色或黄褐色龟裂纹。 病毒病的症状可因病毒种类、甘薯品种以及环境条件等因素的影响而改变,因此根据症状只能作初步判断。另外,目测法还应注意区分甘薯品种特性以及生理病害与病毒病症状的差异。 1.2 牵牛显症法 常用巴西牵牛(Ipomoea setosa)作指示植物,几乎所有侵染甘薯的病毒都能感染巴西牵牛,因此,可从巴西牵牛的显症情况判断薯苗是否带毒。具体嫁接方法如下:以薯苗芽尖作接穗,将芽尖削成楔形,另将具3～4片真叶的巴西牵牛作砧木,在其茎中部切一斜口把楔形接穗插入,用封口膜扎住,置防虫网室内遮阴保湿3～4天,然后在自然光照下观察记载牵牛的显症情况,一般嫁接后10～15天左右开始出现症状,显症初期新生叶出现系统性明脉,以后发展为花叶或皱缩等症状。 1.3 dot-blctelisa法 常用的血清学检测方法为酶联免疫吸附法(ELISA)或在此基础上改进的斑点酶联免疫吸附法(Dot-Blot ELISA)等。Dot-Blot ELISA具有快速且能检测大量样品的特点,在大量检测样品时较常应用。由于甘薯羽状斑驳(SPFMV)等甘薯病毒提纯较困难,难以制备高质量的抗血清,目前,我们成功克隆并在大肠杆菌中表达了SPFMV的外壳蛋白基因,通过提纯蛋白、免疫家兔制备了抗血清,为SPFMV的快速检测奠定了基础。 1.4 rt-pcr检测甘薯病毒的最佳株系 近年来,随着分子病毒学的发展,一些甘薯病毒(例如SPFMV、SPLV等)的核苷酸序列已经清楚,根据已知的核酸序列,设计特异引物,利用RT-PCR可快速检测甘薯病毒和病毒的不同株系。也可利用核酸探针,通过核酸杂交的方法检测病毒的存在。 2 加强对不同级别种薯的检测 由于甘薯脱毒苗在繁育过程中极易受到病毒的再侵染,因此,在繁种过程中,除根据不同级别种薯的繁种要求采取防治蚜虫等必要措施外,还应加强病毒的检测,及时淘汰感病种薯以保证脱毒种薯的质量。根据不同级别种薯对病毒感染率的要求,可采取不同的病毒检测方法。 2.1 结构表现及缺陷 茎尖苗的检测可首先采取目测法。由于脱毒茎尖苗和带毒茎尖苗在形态、长相上有明显差异,前者生长快、叶片平展、植株较健壮;后者长势弱,叶片上常出现花叶、明脉和褪绿斑等症状,因此,可先用目测法淘汰弱苗和显症苗。然后再用血清学方法或分子生物学方法进行筛选,经血清学或分子生物学方法检测呈阴性的样品再进行嫁接每个茎尖苗一般嫁接3～5株,有1株发病即认为该株带毒,对于都不发病的样品应再重复嫁接1次。 2.2 巴西牵牛的观察和随访 脱毒原原种的繁殖一般在防虫网室内进行,原原种田病毒的检测方法是:首先在原原种田种植若干株巴西牵牛,定期观察巴西牵牛是否显症、以判断是否有蚜虫传毒;对原原种田还要进行定期普查,及时淘汰显症株和变异株;另外对原原种田要定期取样,用血清学方法或嫁接指示植物的方法进行检测,以判断原原种田病毒的感染情况对于病毒感染率超标的繁种田要降级使用。 2.3 非脱毒薯/种马铃薯 脱毒原种的繁殖要在有一定隔离区的地方进行,即周围500 m内不能种植非脱毒薯。原种田的病毒检测以目测法和田间种植巴西牵牛为主,必要时田间取样用血清学方法检测病毒的感染率。 2.4 良种田发病率的调查 良种田的病毒检测以目测法为主,就是要定期对良种田的发病率进行调查,必要时也可抽样用血清学检测,当发病率超过一定标准时就不能再作为种薯使用。