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白术健脾有效成分的筛选 中药白术是科百科全科植物科百科全科的根。它主要用于补充脾脏、性温、甜、微苦、兴奋、补水健脾、理气、止汗安胎、脾虚、腹部腹泻、粘液、头晕、水肿、自汗、妊娠等疾病。我国各版药典均有收载, 但至今未有定性、定量指标。人工载培白术主产于浙江、安徽, 此外, 湖北、湖南、江西等地亦产。 白术主要含挥发油、白术内酯类成分, 还含多糖等成分。白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ为抗炎有效成分, 白术挥发油和白术内酯Ⅲ有抗癌作用。关于白术化学成分的研究已有不少的报道。为了进一步研究白术, 确定其行之有效的质量标准, 以更好地开发利用这一药用植物资源, 本文以白术成分对唾液淀粉酶活性的影响、对家兔小肠吸收的影响以及对家兔离体肠管的作用为指标, 筛选白术的健脾有效成分, 为进一步建立白术药材质控指标, 规范白术药材的质量奠定基础。 1 实验材料 1.1 动物 青紫蓝家兔, 雌雄兼用, 体质量2.0~2.5 kg, 2月龄。南京中医药大学实验动物中心提供。 1.2 试剂 白术内酯I、白术内酯Ⅲ, 自制, 纯度均大于98%。 2 方法 2.1 测定唾液淀粉酶活性 取50 mL刻度试管若干, 一只作对照管, 其余作测定管。按文献方法测定唾液淀粉酶的活性。 2.2 肠囊营养液的制备 按文献方法, 制备离体肠管进行小肠吸收试验, 将肠囊置入含葡萄糖 (或Vitamin B6) 浓度为20 mol/L的Krebs-Ringer溶液的温育大试管中, 放入超级恒温浴槽中温育15 min后, 吸取肠管中液体作为给药前的对照;用Krebs-Ringer溶液 (34℃) 冲洗肠囊3次, 加入Krebs-Ringer溶液。温育管中重新加入上述营养液及供试液 (白术内酯Ⅰ、Ⅲ) 100 μL, 温育15 min后, 吸取肠管中液体作为给药后的样本检测。 葡萄糖的测定:以1 mg/mL的葡萄糖溶液为标准液, 以蒸馏水为空白液, 按邻甲苯胺法测定。 Vitamin B6的测定:先配制一系列标准Vitamin B6溶液, 各取0.1 mL加入5 mL盐酸, 以分光光度法测定OD值 (λ=291 nm) , 得标准曲线及回归方程。再取待测液0.1 mL按上法操作, 计算相应VitminB6含量。 2.3 生理指标及给药方式 按文献方法, 制备离体回肠标本, 于4℃冰箱保存备用。 取回肠一段, 悬挂于盛有台氏液的麦氏浴槽中, 一端系在L型通气管上, 加以固定, 供给含有5%CO2的氧气, 另一端固定在压力换能器上预置负荷1 g, 浴槽温度37.5℃, 稳定1 h, 用Maclab生理药理记录仪进行描记。待自发性节律恢复后, 描记基线, 然后开始用药。 用累积法给药:空白组加乙酰胆碱, 累积加入直至回肠对乙酰胆碱的反应最大后停止。洗去台氏液, 当肠管功能恢复后, 加白术内酯Ⅰ 2~3min后, 再按上法加入乙酰胆碱, 记录数据。 3 结果 3.1 影响唾液淀粉酶活性 白术内酯Ⅰ能增强唾液淀粉酶的活性, 而白术内酯Ⅲ对酶活性有一定的抑制作用, 结果见图1。 3.2 影响祖母蚕的吸收 白术内酯Ⅰ能显著地促进离体家兔小肠对葡萄糖和VB6的吸收, 白术内酯Ⅲ虽较给药前吸收值高, 但无显著差异, 结果见表1、2。 3.3 质构对质构的影响 白术内酯Ⅰ对离体兔肠的活动有明显的抑制作用, 并能拮抗由乙酰胆碱所致的肠管痉挛, 量效关系曲线符合非竞争拮抗曲线特征, 白术内酯Ⅲ对离体肠管则无明显作用 (见图2) 。 4 从药养和药之药 (1) 白术为健脾益气、燥湿利水之要药, 中医有“脾主涎”、“涎为脾液”的论述, “脾主运化”, 脾胃健运则食物消化、吸收、运输功能旺盛;反之, 则消化、吸收、运输功能失常。经过对白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ进行活性研究, 结果表明白术内酯Ⅰ具有较强的增强唾液淀粉酶活性、促进肠管吸收、调节肠道功能的作用, 与白术健脾运脾的作用相符合。 (2) 临床上用于健脾的以炒白术为主;不同炮制品中白术内酯Ⅰ的含量也有所差异, 炒白术中的含量明显高于生品, 这也与白术的临床用药相一致。 (3) 白术内酯Ⅰ为结晶性固体, 为白术中含量较高的倍半萜内酯类化合物, 化学性质较稳定, 容易制得对照品;且具有较强的紫外吸收, 薄层色谱易显色, 适合作为定性鉴别和定量分析的对照品。