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玉米叶片衰老过程中光反应特性的变化 玉米生长后期是形成产量的关键阶段，但由于主要是早期品种的叶片开始衰老，光合能力降低，严重限制了玉米有机物质的积累，影响了产量。有研究表明,在后期如延长叶片有效光合功能2 d即能增产11%。Ma等的研究表明,玉米长光合有效期品种(cv.pioneer 3902)在籽粒灌浆期比对照品种(cv.pride 5)多积累24%的干物质。其他植物如高粱、烟草上也有类似的发现。长光合有效持续期对产量的贡献在干旱、瘠薄等逆境条件下更加明显。因此,人们试图通过延长叶片的持绿期达到延长玉米叶片光合功能期的目的,并筛选出了大量持绿品种投入生产。 研究发现,叶片衰老过程中,光合速率会由于非气孔限制而下降,同时伴随与碳同化相关酶的降解或酶活性的明显下降,这与光合暗反应的衰退与光合能力的下降密切相关。然而,迄今为止,人们对植物衰老过程中光反应的活性变化对光合能力的影响认识非常有限。光反应为暗反应提供二氧化碳固定所必需的同化力(NADPH和ATP)。逆境下,当光反应受抑制时,会导致暗反应的同化力供应不足而引起光合速率的下降。 衰老会对叶片产生类似于逆境的影响,即使在没有光存在的情况下也会导致包括膜蛋白在内的叶片蛋白质的降解。前人关于衰老过程中光合能力变化的研究多集中在可溶性蛋白,特别是与卡尔文循环相关酶的变化与光合速率变化的关系,而对光合作用中非常重要的光反应,包括PSI和PSII的活性、光能的吸收、能量的传递和电子传递在叶片衰老过程中的变化,以及它们对衰老过程中光合能力维持的贡献少有报道。本研究用乙烯利诱导离体叶片衰老,通过快速叶绿素荧光诱导动力学曲线分析(JIP test)和820 nm光吸收曲线分析,研究了玉米衰老过程中叶片PSI、PSII供体侧、受体测活性,PSII和类囊体膜稳定性的变化,以及它们对叶片光合性能维持的贡献,以期为持绿/长光合有效持续期玉米品种的选育提供理论基础。 1 材料和方法 1.1 叶绿素含量和光合速率 将早衰型玉米品种黄早四和持绿型玉米品种齐319的饱满种子种植在直径30 cm盆中,栽培用土为育苗基质,养分充足。正常田间管理,充足肥水供应。田间试验中,从开花当日开始每隔7 d测定一次叶片的叶绿素含量和光合速率。 两个玉米品种的生育期和对逆境的抗性有较大差异,为了避免生育期和环境的干扰,在开花后7 d剪取穗位中间15 cm叶段,将其生理学下端分别浸入0.7 mmol L–1乙烯利溶液和水中,置25℃,15μmol m–2s–1光照,12 h/12 h光周期下,每日更换乙烯利溶液和水。分别在处理前和处理3 d后测定相关参数。所有测定点均在叶段最上端1 cm内。 1.2 叶绿素含量的测定 用80%丙酮4℃黑暗浸泡叶片72 h,取提液按照Porra方法,用UV-1601紫外分光光度计(Shimadzu,日本)测定叶绿素含量。 1.3 光合速率ms 田间试验中,用CIRAS-2便携式光合测定系统(PP Systems,美国)测定光合速率。光强、温度、湿度及CO2浓度由CIRAS-2自动控制。测定条件为光强1600μmol m–2s–1,二氧化碳浓度380μmol mol–1,相对湿度60%,叶片温度30℃。 1.4 ojp-k点的标准化 参考Schansker等和任丽丽等的方法,叶片经暗适应20 min后用M-PEA(Hansatech,英国)同时测定叶片快速叶绿素荧光诱导动力学曲线(OJIP曲线)和820 nm的光吸收曲线。OJIP曲线由5000μmol m–2s–1的红光诱导,测定时间为2 s,记录的初始速率为每秒种105个数据。按照我们以前的方法,将OJIP曲线进行O-P点、O-J点和O-K点标准化。O点是0 ms,K点是30μs,J点是2 ms,P点是荧光最大值对应的时刻。 820 nm光吸收曲线由250μmol m–2s–1的远红光光诱导,记录时间为3 s。 1.5 统计分析数据 采用Microsoft Excel 2003软件统计分析数据,用Sigmplot 10.0软件作图。所有数据均为10次重复测定的平均值。 2 结果与分析 2.1 光合速率的下降速度 在田间试验中我们发现,开花后两品种玉米叶片的净光合速率先小幅增加,然后逐渐下降,黄早四叶片光合速率的下降速度明显大于齐319(图1)。开花后齐319叶片的叶绿素含量先维持稳定,14 d后开始缓慢下降,而黄早四叶片的叶绿素含量开花后即开始下降,而且下降速度明显高于齐319叶片。 2.2 乙烯利对叶片叶绿素含量和光合放氧速率的影响 从图2-A可以看出,持绿型品种齐319叶段经乙烯诱导衰老3 d后叶绿素含量只有微弱减少(15%),而早衰品种黄早四下降53.4%。没有经乙烯利处理的黄早四的叶绿素含量也出现了明显下降(36.3%)。叶绿素降解是