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应激抑郁大鼠脑内ofc及其他脑区fos表达的变化 抑郁是一种严重的精神疾病，主要表现为抑郁。随着现代社会生活节奏的加快、工作竞争激烈等各种社会应激因素的加剧, 应激已成为诱发抑郁症的重要因素之一。大脑眶额叶 (orbitofrontal cortex, OFC) 是与情绪密切相关的脑区, 切除猴子此区可使其出现明显的情感变化, 特别是会出现攻击行为与倒错行为。临床上, OFC的损伤常涉及动机失衡及无法预测行为后果, 从而导致人类异常的行为反应, 典型的如行为强迫症、老年抑郁症。Pezzone M A等利用c-Fos技术发现, Lewis大鼠厌恶性条件反射中蓝斑核、孤束核、延髓腹外侧、中脑导水管周围灰质背侧等脑干核团及下丘脑室旁核、杏仁核、丘脑核团、皮层感觉运动区等前脑核团被激活。OFC参与调节情绪行为, 在应激性抑郁症发生过程中, OFC区如何发挥作用需要进一步研究。本试验中采用c-Fos免疫组化技术, 研究强迫游泳试验 (FST) 应激后大鼠各个脑区尤其是OFC区域的活动变化, 进一步确定OFC区域与应激性抑郁症发生的相关性, 从而为探讨抑郁症发病机制提供依据。 1 材料和方法 1.1 大、小鼠脑损伤pahs 健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠, 购自陕西省中医药研究院, 体重250 g～280 g, 每笼4只, 光 (12 h) 、暗 (12 h) 循环, 室温22 ℃～24 ℃, 自由采食饮水。适应1周后开始试验, 随机分为正常对照组, 不做任何应激处理;应激组, 强迫游泳应激。强迫游泳应激30 min后, 大鼠麻醉灌注取脑。 兔抗c-Fos为Santa Cruz生物工程有限公司产品, 二抗 (羊抗兔) 、SABC及DAB为武汉博士德生物有限公司产品, 戊巴比妥钠为上海化学试剂公司产品。灭菌生理盐水。 1.2 方法 1.2.1 大鼠在玻璃缸内的生长 按照Porsolt R D等强迫游泳方法进行。将大鼠单独放入直径20 cm, 高40 cm的圆柱形玻璃缸中, 容器中水深30 cm, 水温为25 ℃～26 ℃, 置于安静的观察室。大鼠经历两次游泳应激:15 min的预游, 取出烘干放回原鼠笼中饲养;24 h后再进行相同的游泳应激。每次做完试验后洗净玻璃缸、清理箱内残留物, 尽量除掉上一只大鼠的气味, 以免影响下一只大鼠的行为。 1.2.2 免疫组化试验 大鼠用乌拉坦麻醉, 取脑做冰冻切片, 切片厚10 μm。试验组切片经山羊血清封闭, 滴加抗体, DAB显色, 苏木素复染、蓝化等。对照组用0.01 mol PBS代替一抗, 其他步骤同上。 1.2.3 同一脑区的图谱观察和图谱观察 参照文献, 从每只鼠的切片中随机各取至少10张, 保证不同鼠要观察的同一脑区在图谱上基本位于相同位置。每张切片上同一部位在光镜下随机选取10个视野 (目镜测微网格) 统计阳性细胞数, 算出每个网格的平均颗粒数, 作为每只鼠的阳性细胞表达数。 1.2.4 统计分析方法 SPSS11.5生物学统计软件数据处理, 所有数据用平均值±标准误(Xˉˉˉ±SE(Xˉ±SE) 表示, 组间差异采用单因素方差分析 (ONE-WAY ANOVA) 。 2 预游应激后鼠不动时间的变化 行为学结果, FST预游时大鼠不动时间平均值为157, FST正式测试时不动时间均值为183, 预游应激后增加了鼠的不动时间。 免疫组化结果, 与非应激组比较, 应激组大鼠眶额叶、海马、下丘脑室旁核、杏仁内侧核、梨形皮质、扣带皮层等多个脑区均有c-Fos高表达 (P0.01) , 表明这些区域在应激条件下被激活, 参与了应激性抑郁的发生 (表1和图1) 。 3 应激对大鼠c-fos表达的影响 应激 (stress) 是生物在生存过程中受到各种各样的刺激后产生的非特异性适应性反应, 短暂适度的应激能使机体分泌足量的激素, 释放更多的能量, 其免疫功能会得到部分提升, 但如果应激强度过强、时间过长, 机体的免疫功能就会受到抑制, 不利于疾病的防御。前额叶 (prefrontal cortex, PFC) 尤其是OFC区是应激反应的通路之一。OFC的损伤可提高动物产生攻击行为的敏感性, 降低它们的欲望, 使其社会性行为消退。OFC异常还会导致大鼠气味跟踪能力的减弱。临床上, 重型抑郁症患者OFC皮层厚度和神经元体积减少。本研究发现大鼠先经历15 min的预游, 24 h后再次将其置于相同的应激条件下, 大鼠的不动时间相对增加, 表明动物在经受FST应激后, 对心理及生理均产生了一定影响, 行为上表现出消极的状态, 因此本试验中采用此方法制造动物抑郁模型具有可行性。 c-Fos作为即刻早期基因 (immediate early gene, IEG) 家族的一员, 具有快速表达、快速降