DB37T 4298—2020绿潮次生毒性的快速检测方法　发光细菌法.docxVIP

ICS CCS 07.060 A 45 37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4298—2020 绿潮次生毒性的快速检测方法 发光细菌 法 Rapid determination for secondary toxicity of green tide—Luminescent bacteria method 2020 - 12 - 30 发布 2021 - 01 - 30 实施 山东省市场监督管理局 发 布 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分： 标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由山东省海洋局提出并组织实施。 本文件由山东省海洋标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：山东省海洋资源与环境研究院、山东省标准化研究院。 本文件主要起草人：宋秀凯、付萍、张秀珍、刘晓波、刘爱英、姜会超、何健龙、程玲、于广磊、 杨沣江。 4 方法原理 绿潮次生毒性的快速检测方法 发光细菌法 1 范围 本文件规定了以一种发光细菌-费氏弧菌（Vibriofischeri）为受试生物的绿潮次生毒性快速检测 与毒性水平评价方法。 本文件适用于绿潮发生海域绿潮藻腐烂液次生毒性的检测。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 绿潮次生毒性 secondary toxicity of green tide 绿潮藻腐烂分解产生的物质对生态环境产生的影响及损害的能力。 3.2 光抑制率 light inhibition rate 水样在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光量降低的百分比。 3.3 光增益率 light gain rate 水样在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光量增加的百分比。 3.4 半数效应浓度 median effect concentration 样品在一定的时间和条件下与发光细菌接触后，发光细菌的发光量减少50 %时的样品浓度。 3.5 水合 reconstitution 处于冷藏环境的发光细菌冻干粉加入一定量的稀释剂恢复至活性。 3.6 水合时间 reconstitution time 添加稀释剂的发光细菌恢复至活性所需要的时间。 3.7 反应时间 reaction time 恢复至活性的发光细菌与对照样本或者待测样本接触的时间。 发光细菌在一定实验条件下的发光强度是稳定的。在一定绿潮次生污染物范围内， 发光细菌接触样 品后的发光强度与样品的急性毒性水平呈显著负相关（P≤0.05），通过分析仪测定细菌发光强度的变 化以表示样品的急性毒性水平。 5 试剂与材料 5.1 发光细菌冻干粉 本文件使用的发光细菌菌株为费氏弧菌（Vibrio fischeriNRRL B-11177）。冻干粉应在-20 ℃~ -25 ℃储存，4 ℃时，保存时间不超过4周； 22 ℃时，不超过24 h。 5.2 稀释剂 稀释剂为2 %氯化钠溶液，用作水合发光细菌冻干粉、稀释样品以及无毒对照样本。2 ℃~8 ℃保存。 宜选用与冻干粉相应的稀释剂。 5.3 参比毒物母液 称取0.05 g七水合硫酸锌（ZnSO4 ?7H2O、分析纯） 溶解于稀释剂中，定容至500 mL，即为参比毒物母 液（100 mg/L）。母液密封4 ℃保存，保存期不超过6个月。 5.4 参比毒物标准液 按照等差、等比倍数相结合的方式， 采用梯度稀释法将参比毒物母液依次稀释至6 mg/L、4 mg/L、2 mg/L、1 mg/L、0.5 mg/L和0.25 mg/L，用于测定发光强度并制作标准曲线。标准液应现用现配。 6 仪器设备 仪器和设备如下： ——生物毒性分析仪； ——温度计：－5 ℃~+40 ℃; ——离心机：5 000 r/min； —— 电子天平：感量 0.00 1 g。 7 样品的采集、保存和预处理 7.1 样品的采集 参照GB 17378.3的规定， 溶解氧、生化需氧量样品采集时应防止搅动水体， 水样不应曝气。避免采 集漂浮物，水样充满样品瓶，并记录当时现场的水温。样品瓶采用经过灭菌的50 mL棕色玻璃瓶。样品 信息采集表参见附录A。 7.2 样品的保存 样品采集后宜在现场尽快进行毒性测定。若在实验室内测定，样品4 ℃保存，24 h内测定；不能在 24 h内测定的， 转入50 mL冻存管内， 于-20 ℃避光保存， 1周内测定。 7.3 样品的预处理 浑浊的样品应通过沉淀或使用离心机以5 000 r/min，离心1 min后，取上清液进行毒性测试。 8 样品的检测 8.