卫生化学课件—高效液相色谱.pptVIP

波长 可的松 氟美松 皮质酮 快速扫描—光电二极管阵列（PDA）检测所获得的三维色谱-光谱图 光电二极管阵列光谱检测器是HPLC检测技术的重大进展。采用这种检测器可以瞬间实时对流出液进行全光谱检测, 使LC能提供的信息量大幅度增加。换句话说, 在一次色谱操作中, 可同时获得吸光值、流出时间和各组分的紫外-可见光谱图在一起的三维谱图, 提供既定量又定性的色谱信号。 性能 内容 1 A(?) 固定测定波长色谱图（常规） 2 A1(?) A2(?) 固定测定双波长色谱图 3 3-Dim 三维空间的光谱色谱图 4 Spectrum 光谱的贮存和记录 5 S1 / S2 光谱比较 6 Edit 贮存光谱数据 表11.6 光电二极管阵列检测器的应用 荧光检测器和化学发光检测器 荧光检测器是一种高灵敏的, 选择性检测器, 其灵敏度比UV 高10-1000倍, 一般可测ppb级的化合物。它用于检测物质本身具有荧光或为了提高灵敏度将无荧光的物质衍生成荧光体。可用荧光检测的物质：如某些代谢物、食品、药物、氨基酸、多肽、胺类、维生素、石油高沸点馏分、生物碱和甾族化合物等。 1．荧光检测器的结构 *激光诱导荧光检测器(Laser inducted fluorescence detector, LIF) 2．色谱衍生技术 色谱衍生技术：在色谱过程中用特殊的化学试剂（衍生试剂），借助于化学反应给样品化合物接上某个特殊基团，使其转变成响应的衍生物之后进行分离检测和直接进行检测的技术。 样品衍生的目的/作用 1）改善色谱分离性能，扩大应用范围。 如GC中增加样品的挥发度和稳定性： 例 1，3，5-三甲基苯甲酸与1，3，5-三甲基酚的酯化反应： 2）提高检测的灵敏度和特异性。如有些化合物既没有紫外吸收又不发荧光, 这类样品可以用衍生的方法, 将待测物转变为具有紫外吸收或发荧光的物质进行检测。例如邻苯二甲醛(OPA)是最通用的伯胺氨基酸衍生剂, 柱前柱后衍生均可，ODS柱分离。 l???紫外检测：UV的测定灵敏度可达10－12 mol / L l???荧光检测：检测范围在 10－12 ~ 10－15 mol / L l???安培检测：灵敏度可达10－13 mol / L 衍生方式 1）柱前衍生：分离与检测 2）柱后衍生：检测，如氨基酸仪分析 由于2-甲基丁基-1，4-二醇不仅缺乏必要的吸收基团，而且不能在OB柱拆分，应采用苯甲酰氯将其衍生为2-甲基丁基-1，4-二醇二苯甲酸酯后才能进行分离测定。 所有合成产物均经柱层析纯化和结构分析。 图 2-甲基丁基-1，4-二醇二苯甲酸酯色谱拆分图 色谱柱： Chiralcel OB 流动相：正己烷-异丙醇(93:7) 检测： 254nm/275nm 流速：0.75mL/min (S)-(-) (R)-(+) 三苯甲酸酯纤维素固定相 蒸发光散射质量检测器(Evaporative Light-Scatting Mass Detector, ELSD) HPLC的发展中受到限制的一个原因, 就是缺少象GC中的FID一样的灵敏、通用型的检测器。20世纪80年代后研制的蒸发散射质量检测器给这一领域带来希望，并向具有真正通用型意义的检测器方向发展。这就是：样品结构不需要具备紫外发色团和合适的折射率；对梯度洗脱和流动相系统的温度变化不敏感；对各种物质的响应因子很接近；在一次分析中可以同时检测主要成分和杂质。 1）? 工作原理 在一定的条件下，光散射强度正比于溶质粒子的大小和数量。散射光强度与样品微粒质量的关系为 I = k mb 式中，m为微粒质量，k、b为实验条件（如温度、流动相性质）决定的常数。因此可根据散射光强度对样品进行定量分析。 散射质量检测和电导测定一样，电导是所有离子的通用性质，光散射是所有粒子的通用性质。对于色谱法来说，溶质已经分离，关键的问题是如何除去流动相和保证检测条件的一致性。 雾化 蒸发 检测 流动相 雾化气体 雾化器 漂移管 Step 1: Nebulization ? Column effluent passes through nebulizer needle ? Mixes with nitrogen gas ? Forms dispersion of droplets Step 2: Mobile Phase Evaporation? Droplets pass through a heated zone ? Mobile phase evaporates from the sample particle? Dried sa