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对化学性肝损伤有辅助保护作用检验方法 1 方案一：四氯化碳肝损伤模型 1.1 原理 四氯化碳 （CCl ）受到肝微粒体酶活化成为三氯甲烷自由基 （CCl •）与蛋白质共价结合导致蛋白合成 4 3 障碍、脂质分解代谢紊乱，引起肝细胞内甘油三酯 （TG）蓄积。CCl •也能迅速与O 结合转化为过氧化三氯 3 2 甲烷自由基（CCl O •）导致脂质过氧化，从而引起细胞膜的变性损伤，致使酶渗漏以及各种类型的细胞病变， 3 2 甚至坏死。 1.2 实验动物 成年大鼠或小鼠，单一性别，大鼠（180－220 克），每组8－12 只，小鼠（18－22 克），每组10－15 只。 1.3 实验方法和步骤 1.3.1 剂量分组及受试样品给予时间 实验设三个剂量组、一个空白对照组和一个模型对照组，以人体推荐量的10倍 （小鼠）或5倍 （大鼠） 为其中的一个剂量组，另设两个剂量组。用CCl （分析纯）造成肝损伤模型，造模方式可以灌胃或腹腔注射。 4 小鼠CCl 灌胃浓度为1%，以食用植物油稀释，灌胃量5mL/kgBW （折合CCl 的剂量为80mg/kg·BW），大 4 4 鼠CCl 灌胃浓度为2－3%，灌胃量5mL/kgBW （折合CCl 的剂量为160－240mg/kgBW）。必要时设阳性对 4 4 照组和溶剂对照组。受试样品给予时间30 天，必要时可延长至45 天。 1.3.2 给予受试样品的途径 经口灌胃给予受试样品，无法灌胃时将受试样品掺入饲料或饮水亦可，并记录每只动物的饲料摄入量或 饮水量。 1.3.3 实验步骤 受试组每日经口灌胃给予受试样品，空白对照组和模型对照组给予蒸馏水。将动物每周称重两次，以调 整受试样品剂量。于实验第30 天将各组动物隔夜禁食16 小时，模型组及各样品组一次灌胃给予CCl ，空白 4 对照组给食用植物油，受试组继续给予受试样品至实验结束 （与CCl 灌胃间隔4 小时以上）。给予CCl 后， 4 4 根据实际情况于24 或48小时处死动物，取血分离血清，测定ALT、AST，并取肝脏进行病理组织学检测。 1.3.4 检测指标 血清谷丙转氨酶 （ALT），谷草转氨酶 （AST），肝脏病理组织学检查 1.4 血清谷丙转氨酶 （ALT），谷草转氨酶 （AST）的测定 1.4.1 测定方法：可选用全自动生化分析仪或赖氏法 （试剂盒）测定。 1.4.2 数据处理和结果判定 采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F 值，F 值F ，结论： 0.05 各组均数间差异无显著性；F 值≥F ，P≤0.05，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统 0.05 计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统 计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。 - 150 - 受试样品组的ALT、AST 与模型对照组比较，差异有显著性，可分别判定ALT、AST 结果阳性。 1.5 肝脏病理组织学变化、诊断标准和结果判定 1.5.1 实验材料：取大鼠肝脏左叶用 10%福尔马林固定，从肝左叶中部做横切面取材，常规病理制片