肿瘤的分子诊断 完整版.pptVIP

不同标本EGFR基因突变检出率 ?不同组织突变捡出率： –47.2% (肺切除标本石蜡组织) –42.9% (新鲜手术切除或活检标本) –38.1% (支纤镜活检样品) –30.8% (支纤镜细胞刷片样品) –42.9% (转移灶活检样品) –30.8% (胸水或腹水样品） * 3)APC基因 APC基因克隆自腺瘤性多发性息肉病(adenomatous polyposis coli, APC)，定位于5q21，编码2842个氨基酸． APC的功能：促进癌基因β-连环蛋白(β-catenin)的降解抑制肿瘤的形成．APC失活导致细胞增殖乃至恶性转化． APC失活见于：腺瘤性多发性息肉，散发性结直肠癌，肺癌等肿瘤． * 4)BRCA1 BRCA1是乳腺癌易感基因１(breast cancer susceptibility gene type 1, BRCA1),是遗传性乳腺癌／卵巢癌综合症的易感基因．定位于17q12-13，含22个外显子，编码1863个氨基酸． BRCA1功能：基因转录调控，DNA损伤修复．失活引起基因组不稳定． BRCA1基因突变或杂和性丢失，导致其失活，常见于乳腺癌和卵巢癌． * 5) p16INK4a p16INK4a 是INK4(inhibitor of CDK4 and CDK6)基因的一种蛋白产物，是一种细胞周期抑制蛋白(CKI) 功能：p16INK4a与cylinD1竞争结合G1期激酶CDK4／CDK6，抑制其对Rb蛋白的磷酸化，结合转录因子E2F-1，结果依赖E2F-1转录的基因不能转录，从而抑制DNA合成，阻止细胞分裂． * p16INK4a 胰腺癌，非小细胞肺癌，神经胶质细胞瘤，急性白血病，鼻咽癌常见p16INK4a基因纯合性缺失． 食管鳞癌，胆管癌常见p16INK4a基因突变． 大肠癌，乳腺癌常见p16INK4a基因启动子部位CpG岛高甲基化． * ６)p21 p21是一种广泛细胞周期激酶抑制蛋白． 功能：p21与多种cylinD／CDK复合物结合，使其丧失磷酸激酶活性，使pRb不能磷酸化，从而使细胞周期停止在G1期；还与PCNA（细胞核增殖抗原）结合，抑制其与DNA聚合酶结合，抑制DNA合成． （１）依赖p53途径．DNA受损， p53上调，诱导p21表达上升． （２）非依赖p53途径．生长因子（EGF，FGF，PDGF等）通过细胞分裂素活化的蛋白激酶（MAPK）途径上调p21表达． 多数肿瘤见其表达异常（尤其黑色素瘤），未见其突变． * ７) 其他抑癌基因WT1 １WT1：肾恶性胚胎瘤易感基因，负调控转录因子，常表现为杂合性丢失． ２DCC（deleted in colorectal cancer, DCC)：结直肠癌缺失基因，其缺失与结直肠癌进展有关． ３PTEN:抑制肿瘤细胞酪氨酸激酶FAK活性，抑制肿瘤细胞生长．通常以杂和性缺失，基因突变，甲基化改变见于多种肿瘤（乳腺癌，卵巢癌，肺癌，肾癌，膀胱癌等） * 3.表观遗传学的改变 表观遗传学：即不是指DNA质与量的改变，而是DNA修饰改变，如甲基化改变，乙酰化改变，小RNA(microRNA)调节． 很多抑癌基因的失活是甲基化表观遗传学改变和突变，缺失等遗传学改变联合作用的结果． * 4.DNA损伤及其分子改变 1物理化学因素（紫外线，电离辐射，致癌物）． ２DNA分子自发改变发生于DNA复制，DNA修复，基因重排过程中，DNA分子自身的化学改变而导致的水解，氧化和甲基化． * 5.基因组不稳定性 正常基因组保持惊人的稳定性和完整性，反映高保真复制 基因突变积累到一定程度，造成染色体畸变，从而造成染色体不稳定． * 6.染色体异常 染色体的结构的改变 * 染色体数目的改变 1）整倍体 多倍体; 具有两套以上的染色体 三倍体：具有三套染色体 2)非整倍体：增加或减少一条或几条染色体 * 7 微卫星不稳定性 微卫星DNA指简单重复序列(1-4bp),在体内是不能表达的。原位杂交实验表明，卫星DNA定位于染色体的异染色质区，与染色体着丝点相连。 肿瘤表现为简单重复序列的增加或丢失． 结肠癌，胃癌，肺癌，胰腺癌 ＰＣＲ检测 肺癌-分子诊断 * Molecular subset of NSCLC (10~16.6%) (19~21%) (5%) (1.9%) (for HER2, Shigematsu, Cancer Res 2005) RET (1~2%) 肺癌—基因诊断和个体化治疗 * EGFR T790M ~250 kb ~300 kb t(2;5) ALK gene breakpoint region 2p23 region Telomere Centromere 3’ 5’ Shaw et al., JCO,