转录与加工 完整版.pptVIP

决定转录起始位点的关键序列，也是基础转录因子TFⅡD的结合位点。包括转录起始子序列和TATA框。 TATA框 转录起始位点上游-25~-35bp处，TATAA(T)A(A)T，两侧却倾向于富含G-C碱基对的序列。决定RNA聚合酶Ⅱ的结合位置以正确起始转录. 单独起作用时，只能确定转录起始位点并产生基础转录。 核心启动子 位于上游-30~-100bp,能较强影响转录的起始频率。 CAAT框（CAAT box） 其一致序列为 GGC(T)CAATCT，一般位于-75附近。 GC框（GC box）在-80～-110含有GCCACACC或GGGCGGG 序列。 CAAT 框和GC 框主要控制转录起始频率，基本不参与起始位点的确定，CAAT 框对转录起始频率的影响最大。 上游调控元件 典型的真核基因启动子 原核、真核基因启动子结构 能显著提高基因转录效率的调控元件（DNA序列）。最早在SV40病毒中发现，可使旁侧的基因转录提高100倍，增强子通常占100-200bp长度，核心组件常为8-12bp，单拷贝或多拷贝串连。 目前在病毒、植物、动物和 人类正常细胞中都发现有增强子存在。 增强子 增强子的作用特点 增强子是一个相当大的单元，含有特定功能的重复序列。 增强子能在远离转录起始位点起作用。 无特定位置。增强子可在基因的上游、下游甚至基因的内部起作用。 增强子的作用与其序列的方向无关。 有组织专一性或细胞专一性。例如，由于免疫球蛋白基因的增强子的激活蛋白仅在B淋巴细胞中存在，其增强子只在B淋巴细胞中有效。 增强子促进基因转录的一个方法是通过推动形成弯曲或环状的二级结构，进而促进基因转录。 基础转录因子（TFⅡ） RNA聚合酶Ⅱ转录某个基因时，通常需要20种以上的蛋白因子结合于启动子上形成转录起始复合物,其中一些转录因子是转录起始必需的，并可维持基础水平的转录。TFⅡ-D， TFⅡ-B， TFⅡ-F， TFⅡ-E， TFⅡ-H， TFⅡ-A。 转录起始复合物 TBP（TFⅡ-D）、TFⅡ-B和TFⅡ-F与RNA聚合酶Ⅱ可在启动子上形成最低限度的复合物，开始转录mRNA，随着TF Ⅱ-E和TFⅡ-H 的加入形成完整的转录复合物并转录出长链的RNA。加入TFⅡ-A可再进一步提高转录效率。 RNA聚合酶Ⅱ的转录起始 TFⅡD与TATA框结合，使DNA变形，导致TATA框形成一个80°的扭结，TFⅡA与TFⅡD结合，并稳定TFⅡD－DNA复合体。一旦TFⅡD结合到DNA上，转录因子TFⅡB就会与TFⅡD结合，而TFⅡB允许RNA聚合酶Ⅱ和另一个因子TFⅡF加入到复合体中。RNA聚合酶被结合上去之后，TFⅡE、TFⅡH和TFⅡJ迅速结合到复合体上。TFⅡH使RNA聚合酶的羧基末端结构域磷酸化,从而促使RNA聚合酶离开启动子区域，进行转录的延伸. 　 TF Ⅱ D:由TATA框结合蛋白TBP（TATA binding protein,TBP)与8种TBP协同因子（TBP associated factor,TAF）组成。识别和结合核心启动子（TATA box　和　Inr）。 基础转录因子（TFⅡ） TFⅡ-B: C端直接结合在TBP-DNA复合物上，而其氨基端可能形成的锌指结构域在TFⅡ-F协同下参与募集RNA聚合酶Ⅱ，是继TBP之后加入转录起始复合物的因子。 开放型起始复合物的形成 RNA聚合酶全酶的一端与-35序列接触后，通过某种变构机制，整个酶分子向-10序列转移，并与之牢固结合，双螺旋链解开，识别模板链。 当-10序列及起始位点处发生局部解链时，RNA聚合酶全酶与启动子即形成开放型启动子复合物，RNA聚合酶在-10序列区域紧密地与启动子结合。 最初，75～80 bp 随着σ因子的脱离， 只覆盖30～40 bp 大肠杆菌ＲＮＡ聚合酶在转录起始阶段的ＤＮＡ覆盖情况 70-80 bp 60 bp 30-40 bp RNA聚合酶在起始时改变“尺寸” 三元起始复合物的形成 随着开放型起始复合物的形成，DNA上形成长约17个核苷酸的开链区，即转录泡。 RNA聚合酶在转录起始位点开始加入第一个核苷三磷酸。当另外一种能够与模板形成配对氢键的核苷酸填充了延伸位点时，两个位点上的核苷酸合成第一个磷酸二酯键，形成三元复合物RNA-DNA-RNA聚合酶。 Transcription bubble 原核RNA合成的延伸 当RNA上最初2～9个核苷酸转录出来后，σ因子即从全酶上解离，核心酶与模板的亲和性下降到与非特异性位点结合的水平，在DNA链上容易移动，为RNA链的延伸创造了条件。释放出来的σ因子可以再与其它核心酶结合重新起始转录。P83图 17bp 13bp 在形成这个短RNA链过程中，每加入一个碱基，聚合酶都有释放RNA导致起始失败的可能