企鹅珍珠贝Cd-MT酶联免疫检测方法的建立及试剂盒的初步研制的中期报告.docx

企鹅珍珠贝Cd-MT酶联免疫检测方法的建立及试剂盒的初步研制的中期报告 本研究以大连渔业大学海水养殖研究中心提供的企鹅珍珠贝为研究对象，通过实验室中的实测数据建立了Cd-MT酶联免疫检测方法，并研制了试剂盒。 一、主要研究内容 1. 企鹅珍珠贝Cd-MT基因克隆和表达 利用高保真PCR技术从企鹅珍珠贝RNA样品中扩增得到Cd-MT基因，并将其亚克隆到pET28a载体中，在BL21（DE3）（E.coli）中进行表达。表达产物在10-15℃下进行纯化，Western blot检测表明，Cd-MT表达已经成功。 2. Cd-MT酶联免疫检测方法的建立 为建立Cd-MT酶联免疫检测方法，我们选择了多种抗体进行免疫反应，包括抗Cd-MT多克隆抗体、抗-兔IgG-HRP和抗快速设备IgG等。通过对不同抗体反应物的筛选，最终选择了抗Cd-MT多克隆抗体和抗-兔IgG-HRP作为最佳组合。通过对Cd-MT的浓度与反应信号之间的稀释比例进行检测，构建了检测标准曲线，标准曲线可作为后续样品检测的基准。 3. 试剂盒的初步研制 以建立的Cd-MT酶联免疫检测方法为基础，研制了一种Cd-MT检测试剂盒。该试剂盒包括Cd-MT多克隆抗体和抗-兔IgG-HRP，以及反应缓冲液、酶标板和标准品等。通过优化试剂盒配方和反应条件等，提高了检测灵敏度和稳定性，并在不同浓度下进行了样本检测，结果表明此试剂盒的检测范围为0.1-10ng/ml。 二、总结 通过以上研究内容的实施，我们成功建立了Cd-MT酶联免疫检测方法，并研制了初步试剂盒。该方法和试剂盒具有较高的检测灵敏度和稳定性，可以实现对企鹅珍珠贝中Cd-MT的定量检测，为企鹅珍珠贝养殖业的绿色发展提供了有力的支持。