一代测序与二代测序的区别与联系.docxVIP

一代测序与二代测序的区别与联系 Sanger法测序(一代测序)Sanger法测序利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点由反应中相应的双脱氧而定。每一种dNTPs和ddNTPs的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几百至几千碱基的链终止产物。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用X-光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。 高通量测序(二代测序)高通量测序技术(High-throughputsequencing，HTS)是对传统Sanger测序(称为一代测序技术)革命性的改变，一次对几十万到几百万条核酸分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术(nextgenerationsequencing，NGS)足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(Deepsequencing)o第一代和第二代测序技术 第 X 代 公司 平台 名称 测序方法 检测 方法 大约读长(碱基数) 优点 相对局限性 第 — 代 ABI/ 生命 技术 公司 3130 xL37 30xL 桑格 毛细管 电泳测 序法 荧光/ 光学 6001 000 高读长，准确度一次性达标率高，能很好处理重复序列和多聚序列 通量低；样品制备 成本高，使之难以 做大量的平行测 序 第 — 代 贝克 曼 GeXP 遗传 分析 桑格 毛细管 电泳测 荧光/ 光学 6001 000 高读长，准确度一次性达标率高，能很好处理重复序 通量低；单个样品 的制备成本相对 较高  系统 序法 列和多聚序列；易 小型化 基因 样品制备较难；难 第 罗氏 组测 焦磷酸 2304 在第二代中最高 于处理重复和同 二 /454 序仪 测序法 光学 00 读长；比第一代的 种碱基多聚区域； 代 FLX 测序通量大 试剂冲洗带来错 系统 误累积；仪器昂贵 HiSeq 可逆链 第 以鲁 2000/ 终止物 荧光/ 2x15 仪器昂贵；用于数 二 米那 miSe 和合成 光学 0 很高测序通量 据删节和分析的 代 q 测序法 费用很高 很高测序通量；在 测序运行时间长； 5500 广为接受的几种 第 ABI/S xlSOL 连接测 荧光/ 第二代平台中，所 读长短，造成成本 二 OLiD iD系 序法 光学 2535 要拼接出人类基 高，数据分析困难 代 统 因组的试剂成本 和基因组拼接困 难；仪器昂贵 最低 读长短，推高了测 第 赫利 Helis 单分子 荧光/ 高通量；在第一代 序成本，降低了基 二 克斯 cope 合成测 光学 2530 中属于单分子性 因组拼接的质量； 代 序法 质的测序技术 仪器非常昂贵 ----资料来源于文献：尹银亮、陈会平、毛良伟《新一代DNA测序技术总览》