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五眼果水提物对小鼠泌尿系结石的影响 第五眼果实是雕刻植物（roxb.）betrtand山区的干燥果核。据《中华本草》记载:其味甘、酸,性平,具有行气活血、养心安神、消积解毒功效,主治气泄血瘀,胸痛,心悸气短,神经衰弱,失眠,支气管炎,食滞腹满,腹泻,疝气,烫火伤等。民间使用五眼果入药治疗泌尿系统结石具有良好临床效果,但关于其治疗泌尿系统结石的药理作用研究目前尚无报道。本文复制泌尿系统结石动物模型,通过检测小鼠的尿液及肾脏中草酸和钙的含量,初步研究五眼果对泌尿系统结石的作用。 1 实验材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验动物 昆明种小鼠,体重18～22 g,由广西中医学院实验动物中心提供,动物合格证号桂医动字第11004号。 1.1.2 仪器、试剂与仪器 722型可见分光光度计(上海医用仪表厂);QL-901震荡仪(海门市其林贝尔仪器制造有限公司); 荡石片(吉林省大峻药业股份有限公司,批;阿法骨化醇软胶囊(1α(OH)Vit D3,南通华山药业有限公司,批号070528);其他化学试剂均为分析纯。 1.1.3 眼果高、中、低剂量的配制 提物制备:取500 g药材粗粉,加入5 L蒸馏水,加热提取1 h,过滤,药渣加入4 L蒸馏水,加热提取0.5h,过滤,合并滤液,浓缩至500 m L,为褐色溶液,4℃冰箱保存备用;五眼果高、中、低剂量:用蒸馏水配成100%、50%、25%的浓度。 溴麝香草酚蓝指示剂:0.1 g麝香溴酚兰溶于20 m L 100%乙醇中徐徐加入蒸馏水80 m L不断振荡直至完全溶解。 1.2 实验方法 1.2.1 药物对尿液结构模型的影响 1.2.1. 小鼠的或加量生药处理 取78只健康小白鼠,♀♂各半,18～22 g,随机分成6组,每组13只,即空白对照组(蒸馏水),模型对照组(蒸馏水),阳性对照组(荡石片,2 g/kg),五眼果高、中、低剂量组(20 g生药/kg、10 g生药/kg、5 g生药/kg),除空白对照组外,其余各组小鼠上、下午分别i.g给予1%乙二醇0.5 m L/只,间隔1 h后,再分别给予饮用水1 m L/只,于每天下午固定时间i.g给予1α(OH)Vit D30.5μg/只1次,每周给予处理6 d。于每天下午固定时间i.g给予相应药物和蒸馏水,给药容量20 m L/kg。连续进行4周,每周第7天给予相应药物或蒸馏水后,收集24 h尿液测定尿草酸和尿钙含量。末次收集24 h尿液后,处死小鼠,取右侧肾脏,匀浆,测定肾草酸、肾钙含量。 1.2.1. 尿尿酸含量及肾物指标测定 尿草酸测定:应用铬酸钾氧化甲基红催化光度法测定尿草酸排泄量:以超纯水作参比,在515 nm处测吸光度。按下列公式计算尿草酸含量: C(mmol/L)=(空白管-样品管)/(空白管-标准管)×0.01 肾草酸测定:用变色酸比色法测定草酸含量,以空白管作参比,在570 nm处测其余管吸光度,按下列公式计算。 C(mmol/L)=样品管/标准管×0.57。 尿钙、肾钙检测:应用EDTA络合滴定法测定。 1.3 统计方法 采用SPSS11.0软件进行处理,实验数据用均数±标准差(x珋±s)表示,组间比较采用t检验,P0.05表示差异有显著性。 2 结果 2.1 高p0.05 结果表明模型对照组与空白对照组比较,造模期间尿草酸明显升高(P0.05)。与模型组比较,高、中、剂量组的尿草酸在实验期间均有明显降低(P0.05),低剂量组的尿草酸在给药后第3、4周有明显降低(P0.05),结果见表1。 2.2 升降p0.05 结果表明模型对照组与空白对照组比较,造模期间尿钙明显升高(P0.05)。高、中、低剂量组与模型组比较,在实验期间均明显降低(P0.05),低剂量组的尿钙在给药后第3、4周有明显降低(P0.05),结果见表2。 2.3 组大鼠p0.05明显升温 结果表明模型对照组与空白对照组比较,造模期间肾钙,肾草酸明显升高(P0.05)。与模型组比较,高、中、低剂量组的肾钙、肾草酸在实验期间均明显降低(P0.05),各剂量对肾钙,肾草酸均有明显降低作用(P0.05),结果见表3。 3 肾物合成对小鼠尿苯用量的影响 诱石剂乙二醇是草酸的前体,进入体内代谢最终转变为草酸,从肾分泌排泄。1α(OH)Vit D3可促进小肠黏膜上皮和小管上皮细胞对钙的吸收,促进骨钙的释放。长期用1α(OH)Vit D3可使小鼠的尿钙浓度升高,尿钙草酸结合成为草酸钙,在肾组织内形成晶体,晶体渐生长、聚集形成结石。临床上许多结石患者对钙吸收主要是通过对维生素D3依赖机制,故1α(OH)Vit D3是草酸钙结石形成的重要危险因素。本实验采用乙二醇和1α(OH)Vit D3等作为诱石液进行动物模型的条件研究。与空白组比较,尿草酸明显升高(