一种多倍体病毒样颗粒在黄岛海珍品养殖场的分离和纯化.docxVIP

一种多倍体病毒样颗粒在黄岛海珍品养殖场的分离和纯化 孔惠德是中国北方沿海海鸥养殖的重要经济品种。目前，它是中国北方海上经济的支柱产业之一。但随着近年来病害的不断加剧,养殖期栉孔扇贝的大规模死亡现象频繁发生,极大地威胁着这一产业的可持续发展。因此,国内围绕扇贝大规模死亡的致病因子及病原学的探讨已引起养殖界各方的高度关注。 2000年我们对山东省内主要扇贝养殖海区开展了系统的病原学和流行病学调查。通过病贝组织超薄切片的电镜观察,在病害高发期的病贝体内大量发现一种球形病毒样颗粒。在此基础上,我们进一步完成了该病毒粒子的分离和纯化,现将有关结果报告如下。 1 材料和方法 1.1 单一壳生长特性 具典型发病症状的栉孔扇贝(壳高4.5～5.0cm)和健康的栉孔扇贝(壳高7.5～8.0cm),分别于2000年7月和12月采自青岛黄岛海珍品养殖场。 1.2 蔗糖梯度的制备 材料的处理:取扇贝消化腺加八倍体积的TEN缓冲液(0.05M Tris-HCl, 0.01M EDTA, 0.4M NaCl, pH 7.8), 以FHX-1型高速分散器4 000r·min-1冰浴研磨匀浆。 初步提纯 (差速离心): 将上述组织匀浆液于4°C 3 500g离心15min,取上清液,以TEN重悬沉淀物,反复离心2～3次。弃沉淀,合并上清液,加入蔗糖配制成终浓度为25%(w/w)的蔗糖垫,于4°C 45 000g