一种含新霉素磷酸转移酶的重组逆转录病毒的浓缩方法.docxVIP

一种含新霉素磷酸转移酶的重组逆转录病毒的浓缩方法 作为一种真正的细胞遗传遗传因素转移的载体系统之一，病毒反演反演过程病毒以其高效感染主细胞，稳定整合到主细胞组，并将其传给后细胞。同时，高度感染的病毒数量也是确保在转移基因转移研究中更好地应用于迁移率等。因此，病毒反演过程中的病毒筛选减少，体积减少，滴度增加，已成为推动转型反演过程体系研究的重要方面。本研究旨在通过差速离心、滤膜截留两种方法的比较及条件的优化,建立可行、高效的重组逆转录病毒的浓缩方法,获得带有标记基因的、具有理想感染滴度的重组逆转录病毒载体系统,从而为使用该系统进行转基因研究奠定了坚实的基础。 1 材料和方法 1.1 菌株和培养基 含有新霉素磷酸转移酶Ⅱ(Neor)重组逆转录病毒载体pLXSN及用于感染靶细胞NIH3T3细胞由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室孟庆文博士惠赠。大肠杆菌DH5α为本室保存菌种。包装细胞系PA317细胞由本室保存,PA317和NIH3T3细胞均用含10%小牛血清的DMEM营养液增殖,维持液为含2%小牛血清的DMEM营养液。工具酶、一般试剂及培养基均购自Promega公司与 Takara 公司。脂质体Lipofectin、G418均为GIBCO公司产品。Centricon-30 浓缩器为Millipore公司产品。SCP55H型超速冷冻离心机,日立公司产品。日本电子GJ