基于hplc指纹图谱的半夏及其炮制品姜半夏不同提取部位的药效研究.docxVIP

基于hplc指纹图谱的半夏及其炮制品姜半夏不同提取部位的药效研究 半夏天南星科植物（pr）是半夏属植物的干燥区域，主要产于四川、山东、河南、陕西、云南、贵州等省。半夏为中医临床常用中药, 其性辛、温, 具有燥湿化痰、消痞散结之功。因其味辛辣、麻舌刺喉, 具有“戟人咽”的刺激性, 故生半夏一般不内服, 临床炮制后应用。姜半夏Pinelliae Rhizoma Praeparatum cum Zingibere et Alumine (PRPZA) 为 《中国药典》2010年版收载的半夏炮制品, 由生姜煎汤, 加白矾与半夏共煮而成, 具有温中化痰、降逆止呕的功效, 多用于痰饮呕吐等。 半夏成分复杂, 主要含核苷类、生物碱、有机酸、蛋白、氨基酸、多糖、挥发油等, 目前报道的与半夏药效、质量相关的成分主要有核苷类、生物碱类和有机酸类。半夏经姜制成姜半夏, 增加了止呕的功效, 与炮制过程中加入生姜有关, 生姜具有降逆止呕功效, 其主要药效成分为6-姜辣素。本实验采用HPLC梯度洗脱法首次建立了半夏及其炮制品姜半夏不同提取部位的HPLC特征指纹图谱, 并对肌苷、鸟苷、腺苷、琥珀酸、盐酸麻黄碱、6-姜辣素6个特征性成分进行指认, 为半夏炮制前后主要物质基础的改变以及二者的质量控制提供可靠方法和科学依据。 1 药品、试剂与仪器 KQ—500DB数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;Agilent technologies 1200高效液相色谱仪;Heidolph-Laborota 4000旋转蒸发仪 (德国海道夫公司) ;Allegra X—22R离心机 (美国贝克曼公司) ;BP121S十万分之一电子天平 (德国赛多利斯公司) 。 对照品鸟苷 (批号86-09-10, 质量分数99.8%) 、 肌苷 (批号140669-200401, 质量分数99.2%) 、腺苷 (批号110879-200202, 质量分数99.8%) 、琥珀酸 (批号110896-200202, 质量分数99.6%) 、盐酸麻黄碱 (批号0714-9903, 质量分数99.7%) 、6-姜辣素 (批号111610-201106, 质量分数98.6%) , 中国食品药品检定研究院;乙腈为色谱纯;水为超纯水;其余试剂均为分析纯。 生半夏药材采自全国5个省份;姜半夏饮片8批, 其中按《中国药典》2010年版方法, 用生半夏炮制3批, 见表1。样品经成都中医药大学中药鉴定教研室李敏教授鉴定为天南星科植物半夏Pinellia ternate (Thunb.) Berit. 的干燥块茎及其炮制品姜半夏。 2 方法和结果 2.1 姜半夏的制备 按照《中国药典》2010年版姜半夏炮制方法进行炮制。 2.2 %乙腈基苯磺酸酯3.2% Agilent Eclipse XDB C18色谱柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm) ;以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱, 洗脱程序:0~10 min, 0.5%~1.0%乙腈;10~15 min, 1.0%~1.5%乙腈;15~30 min, 1.5%~5.5%乙腈; 30~ 35 min, 5.5%~ 10.0%乙腈; 35~ 45 min, 10.0%~15.0%乙腈;45~50 min, 15.0%~20.0%乙腈;50~57 min, 20.0%~26.0%乙腈;57~62 min, 26.0%~33.0%乙腈;62~63 min, 33.0%~37.0%乙腈;63~77 min, 37.0%~50.0%乙腈;77~87 min, 50.0%乙腈;87~92 min, 50.0%~0.5%乙腈;体积流量1.0 m L/min;检测波长265 nm;柱温30 ℃; 进样量10 μL。 2.3 对照品溶液的配制 核苷对照品溶液的制备:精密称取鸟苷、肌苷、 腺苷对照品各2 mg, 分别置于10 m L量瓶中, 加水定容, 摇匀, 配成0.2 mg/m L对照品溶液。 琥珀酸、盐酸麻黄碱、6-姜辣素对照品溶液的制备:精密称取3种对照品各2 mg, 置于10 m L量瓶中, 加甲醇定容, 摇匀, 配成0.2 mg/m L对照品溶液。 2.4 乙醇法提取添加0.4%的微孔滤膜 水提液:分别精密称取半夏、姜半夏粉末 (过60目筛) 各0.5 g, 加水5 m L, 超声提取45 min, 放冷后补足减失的质量, 离心, 取上清液, 经0.45 μm微孔滤膜滤过, 即得。 75%乙醇提取液:分别精密称取半夏、姜半夏粉末 (过60目筛) 各0.5 g, 加75%乙醇5 m L, 超声提取45 min, 放冷后补足减失的质量, 滤过, 回收乙醇, 用甲醇定容至5 m L, 经0.45 μm微孔滤膜滤过, 即得。 95%乙醇提取液:分别精密称取半夏