马铃薯茎尖诱导与壮苗技术研究.docxVIP

马铃薯茎尖诱导与壮苗技术研究 在种植过程中，甘薯容易感染病毒。病毒会随着持续积累而积累，这很容易导致种性退化、产量和品质下降。通过诏书尖脱毒和鉴定病因，我们不仅可以在短时间内获得大量无病毒苗，而且保持品种的良好特性。通过这项工作，甘薯尖脱毒训练的难度主要与茎尖大小、培养基、培训条件和病毒类型有关。这项工作的内容主要是对甘薯茎尖进行剥离和培养，并使用双重免疫吸痰法（das-elisa）对病毒检测进行脱毒苗。进一步提高甘薯茎尖培训的成活率和脱毒率。 1 材料和方法 1.1 茎尖脱毒活性测定 供试材料为田间长势良好无病症表现的大西洋、 费乌瑞它2个品种的植株, 收获后将薯块置于室内2~3 周后, 经检测用不带有马铃薯纺锤块茎类病毒的块茎进行催芽, 放入35~37 ℃恒温箱中进行热处理1个月后, 用解剖刀从薯块切取长1 cm左右的芽置于流水中冲洗1~2 h, 然后置于超净工作台灭菌, 用75%的酒精浸泡30 s, 再用10%的次氯酸钠灭菌6~8 min, 然后在40倍的显微镜下用解剖刀与解剖针剥取带2个叶原基(直径约为0.2~0.5 mm)的茎尖置于培养基中培养. 以MS作为基本培养基并附加一定浓度6-BA和NAA的培养基上培养3~5个月长出小芽后, 转入MS培养基进行继代培养. 马铃薯病毒检测采用酶联免疫检测法(DSA-ELISA), 主要检测马铃薯卷叶病毒(PLRV)、 马铃薯A病毒(PVA)、 马铃薯Y病毒(PVY)、 马铃薯M病毒(PVM)、 马铃薯X病毒(PVX)、 马铃薯S病毒(PVS). 茎尖脱毒的统计标准为: 对茎尖培养成活的植株, 经DSA-ELISA检测, 马铃薯卷叶病毒、 A病毒、 Y病毒、 M病毒、 X病毒、 S病毒均呈阴性. 1.2 试验设计 1.2.1 ms培养实验结果 设计不同浓度6-BA、 NAA与GA3的组合, 研究激素对茎尖成活率的影响. 每个设计组合接种40个直径为0.2 mm带1~2个叶原基的茎尖, 以MS为基本培养基, 培养温度为25 ℃, 光照强度为2 000 lx, 光照时间为8 h, 待芽点转绿后转入MS继代培养中, 4个月后统计实验结果(表1). 1.2.2 茎尖成活率测定 以大西洋和费乌瑞它的块茎芽为材料, 在显微镜下分别挑取带1个叶原基、 2个叶原基、 3个叶原基的茎尖, 接种于MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L培养基中, 每个处理接种40个茎尖, 120 d后统计实验结果. 待芽点变绿后转入MS培养基中继续培养成苗, 统计成活率与检测脱毒率. 茎尖成活率的统计方法参照盖琼辉等的方法. 1.2.3 马铃薯复壮的最佳浓度 本实验设计同一浓度IBA与不同浓度B9相组合, 寻求B9对马铃薯试管苗复壮的最佳浓度. 以大西洋为材料, 在无菌条件下, 将试管苗剪成约2 cm长带有1~2张叶片的茎段, 接种到以下继代培养基中培养, 20 d后统计实验结果(表2). 2 结果与分析 2.1 不同浓度的6-ba、naa、ga3对叶原基茎尖生长的影响 茎尖成活的关键因素是茎尖的大小, 且同一大小的茎尖其成活率与培养激素的浓度有关. 实验结果表明: 以直径为0.2 mm带1~2个叶原基的茎尖在MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA30.02 mg/L培养基里成活率最高, 达50%. 说明较低浓度的6-BA、 NAA与GA3组合有利于茎尖的生长, 但随着6-BA与GA3浓度的增加, 茎尖玻璃化严重, 甚至死亡(表3). 2.2 茎尖的成活率和脱毒率 茎尖的大小对茎尖成活率与脱毒率有一定的影响, 从表4可以看到, 当茎尖越大时, 成活率就越高, 但是脱毒率也就越低; 反之, 茎尖越小, 越难于成活, 但脱毒率会越高. 因为茎尖病毒积累较少, 切取的部位越小, 带病毒就越少, 脱毒率就越高, 但操作的难度也随之而增大, 成活率也会下降. 实验方法主要是对茎尖培养成活的植株进行成活率统计, 并对培养成活的植株进行病毒检测, 测定植株的脱毒效果. 结果表明: 以直径大小为0.2 mm带1~2个叶原基的茎尖为外植体进行培养, 其成活率与脱毒率较高, 分别为68%和56%(表4). 2.3 不同浓度b9对马铃薯植株生长的影响 不同浓度的B9与同一浓度的IBA相结合对马铃薯试管苗复壮效果如表5所示. 当B9浓度为5 mg/L时, 与对照植株相比, 无明显差别; 但随着B9浓度升高, 马铃薯叶色加深, 呈浓绿色, 同时叶片增大, 茎增粗, 植株矮化明显. 当B9浓度达到20 mg/L时, 植株虽然较为粗壮, 但是叶片稍微有些玻璃化. 由此可见, B9在一定的浓度范围内对马铃薯植株矮化和壮苗有一定作用, 但是随着浓度的增高, 对植株生长表现出一定的抑制作用. 因此, 从实