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dna重组技术在动物科学中的应用 dna重组技术是中医学的核心。它规定，在外部条件下，不同生物的基因被移植到“切割”、“融合”和“重组”中，重建遗传物质，并通过载体转移到受细胞。所需的基因因移植到受细胞。dns重组技术包括三种技术方法：酸性分子混合技术、pcr反应、内切酶限制等。在本文中，我们介绍了这一技术在实验动物科学中的应用。 重组DNA技术属于遗传工程分子水平的遗传操作, 是一种按照人的意志定向改变生物遗传性状的技术。广义的遗传工程包括细胞水平的遗传操作 (称为细胞工程) 和分子水平的遗传操作 (称为重组DNA技术) 。狭义的遗传工程就是重组DNA技术, 重组DNA技术是在体外重新组合DNA分子 (脱氧核糖核酸) , 并使其在适当的细胞中增殖的遗传操作, 这种操作可将特定的基因组合到载体上, 并使其在受体细胞中增殖和表达。因此, 它不受亲缘关系限制, 为分子遗传学和育种学以及医学遗传学研究开辟了崭新途径。 1 dns技术的基本步骤 1.1 dna的形成和合成 基因是含特定遗传信息的核苷酸序列, 是遗传物质的最小功能单位, 基因可被分离出来。例如, 从大肠杆菌中可将乳糖发酵基因分离出来。先利用两种有差异的亲缘关系相近的温和噬菌体分别感染两类大肠杆菌, 噬菌体的DNA可与大肠杆菌的染色体发生整合。整合位置恰好都在含乳糖发酵基因DNA片段, 但方向相反, 整合到大肠杆菌中的噬菌体DNA得到复制, 用紫外线刺激大肠杆菌, 使带乳糖发酵基因的噬菌体, DNA可以从大肠杆菌染色体中脱出, 形成带乳糖发酵基因的噬菌体。两种亲缘关系相近的温和噬菌体, 通过加热使其DNA片段双链分开, 形成单链DNA。进一步将两种噬菌体DNA单链混合在一起, 根据碱基互补配对原则, 互补的碱基配对成双链, 不能配对的为单链。然后, 用外切酶把单链DNA切断, 单链被分解, 保留了双链乳糖发酵基因。 基因的合成主要有化学合成和酶促合成两种方法。 (1) 化学合成:例如胰岛素, 已知胰岛素分子由51个氨基酸组成, 它可分为A链和B链, A链由21个氨基酸组成, B链由30个氨基酸组成, 可用遗传密码推导出决定A、B链DNA上的碱基对排列进行入工合成。 (2) 酶促合成是利用限制性内切酶和逆转录酶获得DNA基因片段的方法。目前已从微生物中提纯出600多种限制性内切酶, 其中常用的只有数十种, 用这种酶可获得目的基因。真核生物, 特别是高等动物和植物的结构基因是不连续的“间断基因”, 即DNA可以在内切酶作用下被切断, 无编码意义的内含子被酶分解;而有编码意义的外显子由连接酶连接并转录为m RNA, 可利用逆转录酶得到有关的c DNA基因片段。这种基因片段, 是不含内含子而只有外显子的cDNA。例如兔血红蛋白基因提取, 就是利用逆转录酶作用于m RNA取得相应cDNA。用上述方法也可以得到胰岛素、丝心蛋白等基因。 1.2 病毒、冲突体和质粒 运载体的作用是将分离或合成的基因导入细胞或能转移染色体上的DNA片段, 所以必须能自由出入细胞, 常用的载体有SV40病毒、温和噬菌体和质粒等, 但最常用的是质粒。质粒是染色体以外能够自主复制的遗传单元, 是由双链DNA分子组成, 呈环状结构。可以游离于细胞浆中, 也可与染色体整合在一起, 没有蛋白质外套, 是裸露的DNA分子, 比染色体小, 只带数个或数10个基因, 最大的也只有大约100个基因, 上面有一个位点称为原点, 可以携带染色体转移。 1.3 无性繁殖系重组dna克隆化 用溶菌酶裂解菌细胞分离出质粒。用内切酶处理质粒, 使其DNA在一定位置上断裂, 并在断裂口出现粘性末端。用同样的内切酶处理分离出的目的基因的DNA, 使之具有相同的粘性末端与质粒粘性末端相连接, 形成重组DNA稳定结构。将重组DNA导入不含质粒的细菌, 即受体细菌中, 例如大肠杆菌中, 目的基因能随质粒复制而复制, 并随细菌的分裂而扩增, 形成这一基因的无性繁殖系重组DNA克隆化。1.4重组DNA的表达在加入适量四环素的选择培养基上, 例如抗四环素基因的质粒十胰岛素基因的重组DNA, 可以在大肠杆菌中复制, 扩增产生大量胰岛素。 2 通过氨基酸分子杂交技术和pcr反应应用动物科学 2.1 核酸分子杂交检测 传统的方法多是以免疫学方法检测病原体抗原及其在动物体内产生的抗体, 或者使用不同的方法分离培养微生物, 有时存在灵敏度特异性低及速度慢等问题, 有的病原体侵入机体后需潜伏一定时间后才出现抗体, 用免疫学方法很难及时检测出来, 一些持续感染却不能积极产生病毒颗粒的病毒, 通过检测抗原的方法, 难以检测到病毒, 有的病毒的血清学检测只能确定是否接触过这种病毒, 但不能肯定是否存在现行感染。核酸分子杂交技术可克服以上不足, 并可用于动物群体的大量检