医学免疫学：检测组织细胞中蛋白表达的方法.pptVIP

检测组织细胞中蛋白表达的方法 酶联免疫吸附试验（ELISA） 免疫组织化学技术（IHC） 免疫沉淀（IP） 免疫印迹（Western blot） 酶联免疫吸附试验（ELISA） 为酶免疫测定技术的主要形式。是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的催化放大作用相结合，发展建立的一种非放射性免疫标记分析方法。 免疫组织化学技术（IHC） 用标记的特异性抗体对组织切片或标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究的技术。 几种常见的方法： 免疫荧光法 免疫酶标法 免疫胶体金技术 免疫沉淀（IP） 利用抗原抗体特异结合的特性， 应用特意识别靶蛋白的抗体来 分离、检测细胞或组织中的靶 蛋白的方法。 关键步骤： 细胞裂解 裂解过程中，不但要大量释放细胞内蛋白，还要尽可能保证蛋白的完整性。因此通常要加去污剂（破坏细胞膜磷脂双层结构，能使膜蛋白进一步释放出来溶解）和蛋白酶抑制剂（抑制裂解后细胞提取物中蛋白酶活性）。 免疫沉淀抗原抗体复合物 抗原抗体可先形成复合物，然后再与树脂结合；或者抗体先与树脂结合，然后再与抗原形成复合物沉淀。免疫沉淀所选用的树脂为结合了A蛋白或G蛋白的亲和树脂。抗体Fc段与A或G蛋白的结合能力不同。 免疫印迹（Western blot） 在蛋白质凝胶