植物超氧化物歧化酶活性测量.docVIP

PAGE 1 植物超氧化物歧化酶活性测量 一、实验目的及要求 （1）掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。 （2）了解酶在提取过程中的两个参数：回收率、纯化倍数。 二、实验原理 超氧化物歧化酶(SOD)是一种具有抗氧化、抗衰老、抗辐射和消炎作用的药用酶。它可以催化超氧负离子（O-）进行歧化反应，生成氧和过氧化氢：2O2-+H2→O2+H2O2. 大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD，糖果组合组织或者细胞破碎后，可用Ph7.8的磷酸缓冲液提取。 邻苯三酚在碱性条件下可迅速自氧化,释放出O2-,生成带色的中间产物,在420nm有最大吸收峰。邻苯三酚自氧化产生的中间产物在40秒-3分钟这段时间，生成物与时间有较好的线性关系。 颜色深→SOD逐渐增多→颜色浅，即酶活力越大，颜色越浅。 三、实验材料、仪器设备及试剂 1、实验材料：大蒜 2、仪器：离心机 3、试剂： (1)磷酸缓冲液（pH7.8, 0.05mol/L）)(PH8.3 Tris-HCl ) （2）浓盐酸 (3)邻苯三酚（50mmol.L-1）：称取邻苯三酚0.063g，用10mmol/L HCl溶液溶解，定容至10mL，避光保存。 (5) 考马斯蓝G-250：100mg 考马斯蓝G250溶于50 ml 95%乙醇中，加入100ml 85%(W/V)正磷酸，用蒸馏水稀释至1L，过滤。 （6）牛血清蛋白（1m