三价铝离子-羟基化碳点复合荧光探针的构建及生物成像.docxVIP

三价铝离子-羟基化碳点复合荧光探针的构建及生物成像 碳点（cds）作为一种新型的荧光碳纳米材料，近年来引起了越来越多的研究人员的关注。它不仅具有优良的光学性能和小尺寸特性, 而且还具有良好的生物相容性与极低的生物毒性。近年来, 半导体荧光量子点作为荧光纳米探针在生物、医疗等领域得到了广泛的应用, 然而量子点中的重金属离子对生物和环境均具有很强的毒性, 所以其应用受到了一定的限制。因此, 碳点可有望替代量子点而被广泛应用到生物成像及检测等领域。 最近, 我们报道了一种合成表面羟基化荧光碳点的新方法。所得碳点具有较好的荧光性能、强的水溶性以及低细胞毒性等优点。由于碳点表面带有大量羟基, 所以氢氧化物溶度积较小的金属离子 (如Hg2+, Cr3+, Al3+, Fe3+) 非常容易与其发生作用, 使得碳点发生聚集导致其荧光猝灭, 基于此我们已经研究了Cr3+对碳点荧光的猝灭作用并用于Cr3+的定量检测。我们也制备了羧基化碳点, 并利用其羧基与金属离子的配位特性构建了三价铝离子 (Al3+) -CDs复合荧光探针, 进一步利用氟离子与羧基对金属铝离子的竞争特性建立了环境中氟离子的定量检测方法。 铝作为人体所需的微量元素, 其含量多少与人的生存和健康息息相关。过去人们曾误认为铝对人体无毒害作用, 但实验发现, 人体内过量的铝对神经有毒副作用, 甚至会导致老年痴呆。考虑到碳点在生物医药领域的应用前景, 本文在前文的基础上, 进一步研究了Al3+与羟基化碳点的相互作用, 并与Cr3+和Fe3+与碳点的相互作用进行了对比。结果表明, 低浓度的Al3+能猝灭碳点的荧光;随着Al3+浓度逐渐增大, 被猝灭了的碳点的荧光又逐渐恢复, 而Cr3+和Fe3+二者只对碳点的荧光有猝灭作用, 而无荧光恢复现象。 1 实验部分 1.1 实验试剂与仪器 蜡烛购于西南大学教育超市;氢氧化钠 (99%) 、盐酸 (37%) 均购于重庆川东化学试剂厂;三氯化铁 (重庆茂业化学试剂有限公司) ;硫酸铝 (成都金山化学试剂有限公司) ;三氯化铬 (成都化学试剂厂) ;Tris-HCl缓冲溶液用于调节碳点与金属离子相互作用时的酸度;碳点储备液 (196 mg/L) 存于4℃冰箱中;实验所用试剂均为分析纯, 所用溶液均由二次去离子水 (18.2 MΩ·cm) 配制。 聚四氟乙烯反应釜 (100 m L, 济南恒化科技有限公司) 与电热鼓风干燥箱 (重庆航亚试验仪器有限公司) 用于碳点的合成;F-2500型荧光分光光度计 (日本日立公司) 用于荧光的测定;Zetasizer Nano (英国马尔文仪器有限公司) 用于表征碳点的水合粒径及表面电荷;p HS-3C型酸度计 (成都方舟科技开发公司) 用于酸度的调节;QL-9011型漩涡混合器 (江苏林其贝尔仪器制造有限公司) 用于溶液的混合。 1.2 次表面活性剂的制备 碳点的合成与纯化:碳点按照我们先前报道的方法制备, 即首先用洁净的玻片在烛焰上方收集蜡烛灰, 取约25 mg蜡烛灰与40 g Na OH在100 m L烧杯中混匀, 再缓慢加入40 m L二次水, 混匀并超声30 min得到黑色溶液;其次将上述溶液转移到100 m L聚四氟乙烯为内衬的反应釜中并装好钢套, 于电热鼓风干燥箱中逐渐加热至200℃并恒温12 h, 自然冷却至室温;最后将反应好的溶液离心除去大颗粒的未反应物, 用37%的盐酸调溶液至中性, 再用0.22μm的滤膜过滤, 滤液用MWCO 3500的透析袋于二次水中透析2 d去除氯化钠。透析后的碳点溶液于真空干燥箱中烘干即得到黄褐色粉末状碳点, 称重并溶于二次水中, 即得质量浓度的碳点。 金属离子与碳点作用的光谱测定:在1.5 m L离心管中依次加入适量的二次水、Tris-HCl缓冲液 (文中未加注明的p H值均为5.38) 、适量体积的表面羟基化的碳点 (初始浓度196 mg/L, 终浓度均为39.2 mg/L) 以及相应的金属离子, 漩涡混匀后, 室温反应20 min, 用荧光分光度计 (λex, 310 nm) 进行扫描获得荧光发射光谱。 2 结果与讨论 2.1 al3+浓度对碳点荧光强度的影响 图1为Al3+与碳点相互作用的荧光光谱。图1结果表明, Al3+与碳点的作用可分为两个阶段:在Al3+的低浓度范围内 (图1A) , 随Al3+浓度的增大, 碳点荧光猝灭作用增强并且呈现一定的线性关系, 最大猝灭效率为85.1% (图1A内嵌图, F0为空白的最大荧光强度, F为加入一定浓度Al3+后的最大荧光强度) , 同时伴随其最大荧光发射峰发生蓝移的现象, Al3+浓度在0.2~2μmol/L范围内可以被定量检测, 线性方程:ΔF=-71.1+433.8c (μmol/L) , 相关系数r=0.9978