意见稿-草本葡萄酒多糖测定.docx

草本葡萄酒多糖含量的测定 乙醇沉淀-苯酚硫酸法 1 范围 本文件规定了乙醇沉淀-苯酚硫酸法测定草本葡萄酒多糖含量的分析方法。 本文件适用于草本葡萄酒中多糖含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本 文件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法（ISO 3696：1987，MOD） 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 利用低温条件下多糖在乙醇溶液中聚合形成微颗粒沉淀，再在硫酸的作用下先水解成单糖，并 迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，用分光光度法于 490 nm 波长处测定期多 糖含量。 5 试剂 本方法所用试剂为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的三级水。 5.1 浓硫酸。 5.2 葡萄糖标准溶液（0.1 g/L）： 准确称取 105 ℃干燥恒重的D-无水葡萄糖 0.1 g （精确到 0.000 1 g），加蒸馏水溶解，并定容至 1 000 mL。 5.3 苯酚溶液： 苯酚使用重蒸苯酚，称取重蒸苯酚 10 g，加蒸馏水溶解，并定容至 150 ml，随后保存于棕色瓶中备用。 6 测定步骤 6.1 标准曲线的绘制： 准确吸取 0.1 g/L 葡萄糖标准溶液 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL 分置于 25 mL 具塞试管中，各试管中添加蒸馏水至 2.0 mL,再添加 1.0 mL 苯酚溶液，迅速加入 5.0 mL 浓硫酸,摇匀后放置 5 min, 置于 100 ℃ 水浴中加热 15 min，取出冷却至室温；另以水 2 mL 加苯酚和浓硫酸，同上操作为空 白对照，于 490 nm 处测定吸光度，绘制标准曲线。 6.2 样品处理及测定： 分别取 25 mL 草本葡萄酒于 50 mL 瓷坩埚中在 60 ℃ 下挥发至近干，10 mL 水溶解转移至 50 mL 离心管中加入 40 mL 无水乙醇，混匀后 4 ℃ 沉淀 24 h ，12 000 r/min 离心 10 min，除去上清液， 保留沉淀，随后加入等体积 80% 乙醇溶液 12 000 r/min 离心 5 min，去离子水溶解后定容至 25 mL 待测。 准确吸取适量样品溶液，按标准曲线绘制的方法测定吸光度，根据标准曲线计算出吸取的待测液 中葡萄糖的浓度。 7. 测定结果的计算 7.1 计算公式： 样品中多糖含量根据下式计算： 草本葡萄酒多糖含量（mg /L）= × 0.9 式中：M ——根据标准曲线计算得样品测定液的葡萄糖含量，单位为 mg/L； V1 ——样品定容体积，单位为毫升（mL）； V2——比色测定时所移取样品测定液的体积，单位为毫升（mL）； 0.9——葡萄糖换算成葡聚糖得校正系数。 计算结果保留至小数点后两位。 7.2 重复性： 每个试样取三个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，在重复条件下三次独立测定结果的绝 对差值不应超过算术平均值的 10 %。