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乳酸菌活菌数量检测方法--菌落计数法 本方法适用于乳酸菌制剂及配合饲料中有效活菌数和杂菌率的测定。 按照国家标准 GB/T 14699.1 进行抽样，获得样品 200g，分装于两个无菌、干燥的玻璃瓶中，贴上标签，注明产品名称、批号、取样日期等信息。一瓶供检验用，一瓶密封保，以备复查。 一、测定原理： 乳酸肠球菌用肠球菌琼脂培养基，杂菌用营养琼脂培养基；培养后利用平板菌落计数法进行计数。 二、培养基与缓冲液配方： 营养琼脂培养基，每 L 蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g 氯化钠 5.0g 琼脂 18.0g 水稀释至1000ml PH 7.0~7.4 肠球菌琼脂培养基，每 L 蛋白胨 20.0g 蔗糖 5.0g 葡萄糖 5.0g 乳糖 5.0g 酵母膏 5.0g 氯化钠 4.0g 乙酸钠 1.5gVc 0.5g 琼脂 17.0g 水稀释至 1000ml PH 6.5~7.0 PH6.8 磷酸缓冲液配制方法 取 0.2mol/L 磷酸二氢钾溶液 250ml，加 0.2mol/L 氢氧化钠溶液 118ml，用水稀释至 1000ml，摇匀即得。 三、样品处理： 乳酸菌纯品制剂样品 测定乳酸菌纯品制剂时，取样量为 1g，溶解到 100ml 缓冲液中，缓冲液与样品的比例为 100:1。 配合饲料样品 测定饲料样品时，取样量为 25g，溶解到 225ml 缓冲液中，缓冲液与样品的比例为 10:1。 四、有效活菌数、杂菌数的测定： 本方法采用平板菌落计数法 操作方法： 1．取磁力搅拌棒装入 500ml 三角瓶中，再量 225ml PH6.8 的磷酸缓冲液一并装入三角瓶中灭菌备用。纯品制剂量取缓冲液 100ml。 取 取 25g 饲料样品放入三角瓶中，在磁力搅拌器中震荡混匀 5min 后，再放到 摇床上 37℃，150 转/分，充分震荡 45min，混匀成 1：10 稀释液。纯品制剂样品量为 1g，混匀成 1：100 稀释液。 在超净工作台内用灭菌的 1.5ml 离心管，按 10 倍比稀释法稀释。用移液器吸取上述混悬液 100ul，注入含有 900ul 缓冲液的离心管内，并在液体中反复吹打 5 次，在漩涡振荡器上震荡 30s 混匀（注意每次稀释时更换枪头及充分震荡混匀）。 按上述操作顺序，做 10 倍比稀释，纯品制剂推荐稀释到 10-8，配合饲料推荐稀释到 10-4。 选择 4 个适宜稀释度，吸取该稀释度的液体 10 ul 滴于灭菌平皿上，每个稀释度做 3 个平行。（注意分三点滴，便于液体充分散开） 置于烛缸中 37℃培养 36 h 后，计数菌落。 （3）计算公式： 1、有效活菌数： a.计算出平皿同一稀释度 3 个平行组的菌落平均数。b.产品活细胞数＝菌落平均数×稀释倍数×10 2、杂菌率①：杂菌率（%）= [杂菌数÷（有效活菌数+杂菌数）]×100% 注① 只对乳酸菌纯品制剂进行评定，对配合饲料不采用这个指标。