结肠癌细胞氨甲蝶呤耐药机制中二氢叶酸还原酶信号通路的功能研究的中期报告.docxVIP

结肠癌细胞氨甲蝶呤耐药机制中二氢叶酸还原酶信号通路的功能研究的中期报告 本研究旨在探究结肠癌细胞氨甲蝶呤（5-FU）耐药的机制，特别是二氢叶酸还原酶（DHFR）信号通路在其中的作用。在前期的研究中，我们首先建立了结肠癌细胞株HCT116的5-FU耐药模型，并进行了RNA测序分析，发现DHFR是一个显著上调的基因。因此，本期研究的重点是通过DHFR信号通路对5-FU耐药的影响进行深入研究。 首先，我们利用Western blotting技术检测了HCT116细胞在不同浓度5-FU处理下DHFR的表达情况。结果显示，在5-FU作用下，DHFR蛋白的表达量显著上调，并且随着5-FU的浓度增加，DHFR表达量也逐渐增加。此外，我们利用药物对照实验发现，5-FU可以增加DHFR的转录水平，但是采用DHFR抑制剂Trimetrexate（TMQ）可以降低DHFR的蛋白表达水平。 进一步的实验证实，DHFR信号通路对结肠癌细胞的5-FU敏感性具有明显调节作用。具体来说，我们利用MTS实验检测了HCT116细胞在不同浓度5-FU处理下的存活率，发现采用DHFR抑制剂TMQ可以显著增加细胞对5-FU的敏感性。此外，管束实验结果也证实了DHFR抑制剂可以增加5-FU诱导的细胞凋亡。 最后，我们还探究了DHFR信号通路对结肠癌细胞代谢活性的影响。结果显示，5-FU与DHFR抑制剂联合作用后能够显著抑制细胞的羟基脯氨酸生成，提示这种联合作用有助于抑制细胞的代谢活性。 综合上述结果，本期研究发现结肠癌细胞对5-FU耐药的机制与DHFR信号通路密切相关。DHFR的上调可以导致细胞的5-FU耐药性增强，但是采用DHFR抑制剂可以提高细胞对5-FU的敏感性。这些研究结果为未来开发针对DHFR信号通路的治疗方法提供了有益的指导意义。