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野葛异黄酮合成酶基因的克隆、亚细胞定位及功能鉴定的中期报告
本研究旨在克隆野葛异黄酮合成酶基因，对其亚细胞定位以及功能进行鉴定。目前，已经完成了基因克隆以及亚细胞定位的初步实验。
首先，利用RT-PCR技术从野葛总RNA中扩增出了目标基因的全长序列，该序列长度为1763bp，包含一个1527bp的开放阅读框（ORF），编码508个氨基酸，预测蛋白分子量为56.2 kDa。序列分析显示，该基因编码的蛋白具有异黄酮合成酶的保守结构域。基于氨基酸序列比对，该蛋白与其他植物异黄酮合成酶具有较高的相似性。
接着，对该基因进行亚细胞定位。利用基因工程技术，将该基因的编码序列与绿色荧光蛋白（GFP）融合，构建了野葛异黄酮合成酶-GFP融合蛋白表达载体。将该载体转染至草莓叶片细胞中，并通过激光共聚焦显微镜观察发现，融合蛋白被定位于质体中，与叶绿体没有共定位。这一研究结果表明，野葛异黄酮合成酶在植物细胞中主要定位于质体中。
目前，我们正在进行该基因的功能鉴定实验。以本研究所克隆的野葛异黄酮合成酶基因为材料，利用基因工程技术进行基因过表达与敲除实验，以评估该基因在野葛异黄酮合成中的作用。未来计划还包括对该基因的调控机制的深入研究。
总体来说，本研究对野葛异黄酮合成酶基因的克隆以及亚细胞定位研究已经取得了初步进展，功能鉴定的结果将为我们深入探究野葛异黄酮合成机制提供有力支持。
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