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二氢杨梅素的提取与应用研究进展 二羟基杨树林素（3、3、7、3、4、5）二羟基黄酮醇，又名三羟基黄酮醇，是一种由丙醇和抑制的黄酮醇。二氢杨梅素大量存在于葡萄科蛇葡萄属植物中,尤其是藤茶(Ampelopsis)中其含量高达29%。二氢杨梅素具有消炎、止咳、祛痰、镇痛、抑菌、降脂、抗肿瘤、抗高血压、保肝护肝等诸多生物活性,极具开发潜力。因此,二氢杨梅素的提取和应用受到国内外广泛关注。作者在此综述了其提取方法和应用研究进展。 1 二羟杨梅素提取方法 1.1 提取法和浸泡提取法提取法 传统的二氢杨梅素提取方法有热提取法(煎煮法、回流提取法) 和浸泡提取法( 渗透法、冷浸法),均存在费时、费溶剂、效率低、重现性差、提取率低等不足,而且所用溶剂通常有毒, 易对环境和操作人员造成危害。 1.2 氢杨树林的纯化 张友胜等成功利用大孔吸附树脂实现了“ 增温溶解, 保温过柱, 温水洗脱”的方法提取DMY。该方法的适宜温度为50~70℃,最佳温度为60℃,能很好地将70%左右的二氢杨梅素提纯到80%;提纯二氢杨梅素时,单位数量D-16 大孔吸附树脂处理料液的数量,主要取决于料液中二氢杨梅素的纯度。 树脂吸附法有以下优点:工艺简单,操作方便,能耗少;操作条件温和,避免了有效成分失活,而且无毒、无污染;树脂容易回收再生,可反复利用,提取效率高。但是仍存在以下缺点:树脂用量过大,只适合于小批量的生产,不适合大批量的工业生产。 1.3 微波条件下二氢杨树莓原汁最佳提取工艺的确定 杨铃等通过正交实验对微波萃取DMY的工艺条件进行了研究。结果表明,影响DMY提取率的因素为提取温度 微波辐射时间 料液比, 最佳提取条件为:提取温度95℃,微波辐射时间15 min,料液比1∶20。采用微波萃取法大幅提高了提取效率,提取时间从直接热提法的30 min 缩短到了15 min,而且以高效液相色谱直接测定目标成分的含量,检测更加简便、快速。郑成等以干藤茶叶为原料,在微波辐射条件下,以水为溶剂提取二氢杨梅素,确定最佳提取工艺条件为:微波功率高档,微波辐射时间3 min,料液比1∶20,水浴浸提时间2 h。此条件下二氢杨梅素的提取率为29%。韦星船等采用MARS5 微波和压力蒸气灭菌器,以稀碱水为溶剂, 选择吸光度法为测定方法,确定最佳提取条件为:高温高压时间45 min, 料液比1∶25, 微波温度95℃, 微波时间5 min, 微波功率600 W, 转子高速。此条件下二氢杨梅素提取率为30.94%。 1.4 微波与流化床相结合提取 逆流法提取是指提取剂从第一级加入流向最后一级, 而物料从最后一级加入流向第一级, 即两相逆向流动。由于DMY在热水和冷水中的溶解度差别很大, 故可选择以水为提取剂,采用逆流法对原料中的DMY进行提取。李卫等研究了逆流法提取DMY的工艺条件,结果发现,温度越高越有利于DMY的提取,用沸水提取的收率最大, 提取时间在60 min以前,DMY的收率随提取时间的延长而增大, 用偏碱性的水比用中性或酸性水要好。这种方法具有降低能耗、 节约成本、 提高安全性的优点。 此外,还有微波与逆流相结合的提取方法。张友胜等和Du等采用高速逆流色谱法( HSCCC) 对提取的DMY粗品进行纯化,得到纯度达99%以上的产品。这种方法避免了分离样品与固态载体表面发生化学反应而变性以及不可逆吸附等缺陷; 残留溶剂容易在较短时间内冲净,不会对后续分离产生影响, 提高了分离样品的回收率。这种方法的关键之处在于合适的溶剂系统的选择和配比。 1.5 设备回收率低、不能实现大规模生产 超临界流体萃取DMY具有节省试剂、 无污染等优点, 但回收率较低、一次性设备投资较大、 运行成本高,因此很难实现大规模生产。目前国内外未见超临界流体萃取DMY的报道。 2 二羟杨梅素的应用 2.1 生理活性 2.1.1 dmy对慢性肉芽肿的影响 魏捷发现,从藤茶中分离出的DMY对巴豆油和角叉菜胶引起的急性炎症和纸片埋藏引起的慢性肉芽肿均有明显的抗炎作用。易诚报道,DMY对小鼠巴豆油性耳廓水肿、小鼠角叉菜胶性、甲醛性足跖肿胀及腹腔毛细血管通透性、急性、亚急性炎症的渗出过程均有抑制作用;对小鼠醛酸性扭体反应和热水反应显示一定的镇痛作用,能提高小鼠的痛阈水平。 2.1.2 dmy的红排泌量 钟正贤等对小鼠做了一系列实验,结果发现,DMY添加量为1.0 g·kg-1和0.5 g·kg-1的2个组比阳性氯化铵(1.0 g·kg-1)对照组的酚红排泌量均有明显提高,证实DMY有明显祛痰作用;同时DMY能明显延长咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,其中大剂量组(1.0 g·kg-1)的止咳作用强度与阳性对照组咳必清相当。 2.1.3 dmy对兔胸径收缩的影响 周天达等、刘建新等报道,DMY能抑制去甲肾上腺素和高K+所致的兔胸