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高效液相色谱法测定化妆品中的苯氧异丙醇 苯氧异丙醇化学化合物（phenoniso-2-丙醇）被称为1-苯氧基-2-丙醇。这是合成阴离子的消费品。用作溶剂和添加剂。目前欧盟EEC和我国《化妆品卫生规范》均规定苯氧异丙醇用于淋洗类产品中限用质量分数为2.0%,用作化妆品防腐剂限用质量分数为1.0%。 根据苯氧异丙醇的特性可以使用气相色谱法和高效液相色谱法对其进行分析。目前,已有超高效液相色谱法的报道,该方法虽可同时检测24种防腐剂,但化妆品中的苯氧异丙醇与其他组分混合在一起,使用该方法无法有效分离杂质。Borremans等采用了一种高效液相色谱法测定苯氧乙醇、苯氧异丙醇以及苯甲酸酯类等物质,但该法的预处理方法无法实现对不同基质化妆品的有效提取,适用性较窄。作者采用高效液相色谱法分析化妆品中的苯氧异丙醇,并引入超声辅助提取法作为预处理方法,以期为化妆品中苯氧异丙醇的检测寻找到一种准确性高、可靠性强、适用性广的实验方法。 1 实验部分 1.1 仪器和检测方法 甲醇、乙腈、四氢呋喃(THF),均为色谱纯,德国Merck公司;苯氧异丙醇对照品,w(苯氧异丙醇)=93.0%(气相色谱法),美国Sigma-Aldrich公司。Agilent 1100型高效液相色谱仪(带有紫外检测器),美国Agilent公司;KQ-440KDB型超声清洗器,中国昆山市超声仪器有限公司;SARTORIUS AG CP224S电子天平,德国Sartorius公司;QL-901型涡旋振荡器,中国海门市其林贝尔仪器制造有限公司。 1.2 流动相vf Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm i.d.,5 μm);流动相为V(水)∶V(乙腈)∶V(甲醇)∶V(四氢呋喃)=60∶25∶10∶5的四元混合溶液;流速1.2 mL/min;检测波长268 nm;进样量20 μL;柱温30 ℃。 1.3 标准储备溶液的配制 精密称取0.054 0 g苯氧异丙醇对照品,精确到0.000 1 g,于50 mL棕色容量瓶中,加入甲醇溶解并定容,得到质量浓度为1.0 mg/mL的苯氧异丙醇标准储备溶液。 1.4 流动相液液l甲醇、s液液相色度 精确称取0.25 g试样,置于25 mL具塞比色管中,加入20 mL甲醇,涡旋60 s,再超声15 min,冷却到室温后,用流动相溶液定容至25 mL刻度线,涡旋振荡摇匀,经0.45 mm滤膜过滤,滤液可根据需要进行稀释,保存于2 mL棕色进样瓶中作为待测样液,备用。 2 结果与讨论 2.1 色谱条件优化 利用实际样品和空白样品进行色谱条件的选择与优化。实验结果发现在常规的二元流动相的洗脱下极难将苯氧异丙醇与杂质分开,而在上述条件下苯氧异丙醇的峰形较好,杂质峰与目标峰分离度符合要求(R1.5),且出峰较快。在该色谱条件下,苯氧异丙醇的色谱图见图1。苯氧异丙醇的特征吸收波长为268 nm,经验证,该波长可满足实测所需。 2.2 超声强度的影响 超声辅助提取法是化妆品预处理的常用方法之一。考察了超声强度、超声时间和料液比3个因素对苯氧异丙醇提取率的影响。结果发现超声强度加强可缩短破乳和提取的时间,但超声时间多于15 min以后提取率不再明显提高,料液比(m(样品)∶V(甲醇),g∶mL)≥1∶80时提取率不再显著增加。由于超声时溶剂会有少量损失,同时为计算方便,故需要在提取后定容至料液比为1∶100。故选择100%的超声强度,超声时间为15 min,料液比为1∶100。 2.3 标准曲线的绘制 将苯氧异丙醇的标准储备溶液稀释成质量浓度分别为1.0,10.0,50.0,100.0和200.0 mg/mL的系列标准溶液。移取20 μL系列标准溶液,注入高效液相色谱仪中进行测定,以色谱峰的峰面积(A)为纵坐标,标准溶液的质量浓度(ρ)为横坐标,绘制标准曲线。苯氧异丙醇的标准曲线方程为:A=74 280ρ-23 780,r=0.999 9。苯氧异丙醇在1.0~200.0 μg/mL内呈良好的线性关系。 2.4 标准曲线的建立 配制低、中、高3种质量浓度(10.0,50.0,150.0 μg /mL)的标准溶液各6份,在上述色谱条件下分别进样测定苯氧异丙醇的峰面积响应值,计算相应的RSD值,分别为0.85%,0.96%和0.66%。由此可知,方法的精密度良好。 2.5 稳定性 2.5.1 峰面积响应值测定 取质量浓度分别为10.0和100.0 μg/mL的2种标准溶液置于室温下,24 h内测量5次,从第一次起每隔一定时间测定一次,所得峰面积响应值代入标准曲线,再计算得到RSD。结果见表1。由表1可知,根据《化妆品及其原料中禁限用物质检测方法验证技术规范》中的相关规定,所得的RSD5.0%,表明在常温时苯氧异丙醇标准溶液在24 h内稳定。 2.