高效液相色谱法同时检测3种红黄蓝色素.docxVIP

高效液相色谱法同时检测3种红黄蓝色素 有很多类型的染料。对于儿童食品而言,由于儿童的脏器处于发育期,其消化代谢能力也远不如成人,因此对食品安全的要求更高,常常需要对相关的色素的添加进行严格把关,完善其检测的标准和质量体系。目前我国GB 2760—2011《食品添加剂使用标准》及其增补品种规定允许使用的着色剂为64 种( 类)［1］。其中,胭脂虫红是一种蒽醌类天然色素,目前在我国允许添加于多种类型的食品中,但有报道指出可能引起哮喘患者的过敏现象［2］。喹啉黄为偶氮类合成色素,常用于糕点、冰激凌、软饮料等食品的着色,我国仅允许在预调酒中添加,有导致儿童多动症的风险［3］。此外,食用蓝色素是较为稀奇的一类色素,目前在我国食用的蓝色素有: 靛蓝、亮蓝、栀子蓝和藻蓝。碱性蓝类物质是一类不安全的染料,决不可作为食用色素添加于食品［4］。 目前,虽然已有文献报道可采用高效液相色谱测定胭脂虫红酸［5，6］、喹啉黄［7，8］和碱性蓝26［9］。但是关于开展儿童食品中分析检测上述着色剂的方法较少,尤其是对这些吸收波长差别较大着色剂的同时检测方法的报道甚少。为此,我们采用高效液相色谱紫外法对目前无检测标准的上述禁限着色剂进行检测方法研究,建立棒冰食品中喹啉黄、胭脂虫红、碱性蓝26 的同时检测分析方法,且详细地研究了适合的前处理技术。这不仅为目前允许但限量使用的色素提供行之有效的检测方案,也为禁用色素的检测储备分析方法,对食品安全检测与管理是十分重要的。 1 实验部分 1.1 实验设备和试剂 LC20 高效液相色谱仪( 日本岛津公司) ; Mil-lipore超纯水机( 美国密理博公司) ; 万分之一电子天平( 瑞士梅特勒公司) ; p H计( 日本Horiba公司) ; 电热恒温水浴槽( 上海精宏实验设备有限公司) ; 1-14K离心机( 德国Sigma公司) 。 乙腈、甲醇、醋酸、氨水( 分析纯) 、色素标准品: 碱性蓝26( 维多利亚蓝B CAS: 2580-56-5) ( 国药集团化学试剂有限公司) ; 胭脂虫红酸( CAS:1260-17-9) 、喹啉黄( CAS: 8004-92-0 ) ( TCI试剂公司) 。 准确称取胭脂虫红酸、喹啉黄、碱性蓝26 各10 mg,分别倒入100 m L玻璃容量瓶中。向其中加入10 m L甲醇进行溶解,随后加入水定容至100 m L,配置成100 μg / m L的标准品溶液,并放置于4 ℃冰箱中保存。 1.2 流动相及洗脱条件 色谱柱为日本YMC公司原装HPLC Column Hydrosphere-C18 色谱柱( 250 mm × 4. 6 mm i. d.5 μm) 。流动相A: 0. 1% 甲酸水溶液( 氨水调节p H 4. 0) ; B: 乙腈; 流速1. 0 m L / min,梯度洗脱条件见表1; 进样量为20 μL。胭脂虫红酸的检测波长为280 nm,喹啉黄的检测波长为410 nm,碱性蓝26 的检测波长为595 nm。 1.3 方法 1.3.1 标准溶液的配制 将色素储备液用超纯水稀释,并配制成含有胭脂虫红酸、喹啉黄和碱性蓝26 的标准溶液,浓度分别为100、50、10、5、1、0. 5、0. 1 μg /m L的标准溶液。用0. 22 μm滤膜过滤后进行液相色谱分析。每个浓度进样3 次,取3 次平均值,所得色谱峰的浓度和对应的峰面积绘制标准工作曲线。 1.3.2 标准溶液的配制 将购买棒冰去包装纸,置烧杯内溶解后移入干净离心管中保存。将两份2 g棒冰待测液精确称量至15 m L离心管中,各加入8 m L超纯水中,充分混合。其中一份标记为样品,另一份准备加入标准溶液1 m L,标记为加标样品。随后,以转速为12 000 r/min离心15 min,弃沉淀和油脂部分,取上清备用。 1.3.3 样品的前处理脱水洗脱 上述样品上清液用聚酰胺SPE小柱净化,净化过程为: 先用3 m L甲醇和3 m L双蒸水冲洗柱子,再用3 m L 2% 甲酸冲洗柱子之后可以上样,2 g样品前处理溶液全部上样。随后再用双蒸水洗涤3 次,最后用3 m L 10% 氨水-甲醇分别洗脱胭脂虫红酸和喹啉黄,3 m L乙腈洗脱碱性蓝26,合并所有的洗脱液。洗脱液在40 ℃ 水浴锅中氮吹吹干后用3 m L甲醇水溶液( V( 甲醇) ∶V( 水) = 1∶ 9 ) 溶解。该样品溶液置于- 20 ℃ 冰箱中保存,且可以直接用于色谱分析。 2 结果与讨论 2.1 紫外分光光度法检测3种常用试剂的同时检测 取10 μg /m L胭脂虫红酸、喹啉黄和碱性蓝26 标准溶液,在190 ~ 600 nm波长范围内进行紫外可见光谱扫描,结果表明胭脂虫红酸在280nm,喹啉黄在410 nm,碱性蓝26 在595 nm处有良好的紫外吸收;