分子发光分析法演示文稿.pptVIP

2、单色器 第一单色器作用：激发单色器，分离出所需要的激发光，选择最佳激发波长? ex 。 第二单色器作用：发射单色器，滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择测定用的荧光波长? em。 当前第30页\共有63页\编于星期四\20点 3、样品池 通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边。 4、检测器 荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管 当前第31页\共有63页\编于星期四\20点 SK-2003A型荧光光谱仪(国内首创） 当前第32页\共有63页\编于星期四\20点 磷光分析法 与荧光相比，磷光的特点： 1、磷光寿命比荧光长 2、磷光辐射的波长比荧光长 （一）磷光强度： Ip＝KC （二）温度对磷光强度的影响 试样需在液氮温度（77K）或液氦（4K）下测定 当前第33页\共有63页\编于星期四\20点 磷光分析仪器 与荧光分析仪器相似，主要差异如下： 1. 试样室 试样需在液氮温度（77K）或液氦（4K）下测定－低温磷光（将液池放在盛放液氮的杜瓦瓶内） 固体表面室温磷光分析需特制试样室 2. 磷光镜 有些物质既可产生荧光，又能产生磷光。用机械切光装置——磷光镜区别荧光和磷光。利用荧光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。 当前第34页\共有63页\编于星期四\20点 磷光仪器在荧光仪样品池上增加磷光配件：低温杜瓦瓶和斩光片。如右图所示。斩光片的作用是利用其分子受激所产生的荧光与磷光的寿命不同获取磷光辐射（书中96页） 当前第35页\共有63页\编于星期四\20点 室温磷光 低温荧光需低温实验装置且受到溶剂选择的限制，1974年后发展了室温磷光（RTP）。 1）固体基质室温磷光 在室温下以固体基质（如纤维素等）吸附磷光体，增加分子刚性、减少三重态猝灭等非辐射跃迁，从而提高磷光量子效率。 2）胶束增稳室温磷光 利用表面活性剂在临界浓度形成具多相性的胶束，改变磷光体的微环境、增加定向约束力，从而减小内转换和碰撞等去活化的几率，提高三重态的稳定性。 3）敏化溶液室温磷光 当前第36页\共有63页\编于星期四\20点 三、荧光分析方法和应用 1、荧光分析法分类 一、直接荧光法：芳香族有机化合物分析 二、间接荧光法（衍生化法和荧光探针法） 2、荧光分析法的特点： （1）灵敏度高 比紫外-可见分光光度法高2~4个数量级，检测下限在0.1~0.001μg /mL （2）选择性好 荧光法既能依据特定发射，又能依据特定吸收来鉴定物质 （3）试样量少和方法简单 （4）提供比较多的物理参数 当前第37页\共有63页\编于星期四\20点 3、应用 一、定性分析 荧光物质的特征光谱有激发光谱和荧光光谱两种，可以将荧光物质的特征光谱与标准物质的光谱比较，以确定是否为同一物质。 二、定量分析 定量分析依据 F = KC 当前第38页\共有63页\编于星期四\20点 三、 无机化合物的分析 无机化合物中，能直接产生荧光并应用于测定的为数不多，但与有机化合物生成发荧光的有机配合物后，进行荧光分析的元素达几十种，其中较常采用荧光法测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd及某些稀土元素 荧光猝灭法也是荧光分析中经常采用的方法。可采用荧光猝灭法间接测定的离子有：F-、S2-、Co2+、Ni2+、Cu2+等 当前第39页\共有63页\编于星期四\20点 2. 有机化合物的分析 脂肪族有机化合物的分子结构较为简单，本身能发荧光的很少，芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系，多数能发荧光；可直接用荧光法测定。但是为提高荧光分析的灵敏度和选择性，大多数采用荧光衍生化法。 3.荧光检测与色谱分离联用 4.荧光免疫分析 当前第40页\共有63页\编于星期四\20点 化学发光分析 一、概述 化学发光是吸收化学反应所释放化学能而使分子发光所建立的分析方法 化学发光与荧光的主要区别：受激发时所需的能量来源不同，需要化学反应过程中所提供的化学能 当前第41页\共有63页\编于星期四\20点 化学发光分析具有以下特点 灵敏度高——例：用荧光素酶和三磷酸腺苷ATP的化学发光反应，可测定低至2×10-17 mol·L-1的ATP 线性范围宽——一般有5~6个数量级 仪器设备简单，成本低廉 分析速度快，易实现自动化 局限性：可供发光用的试剂有限 发光机理有待进一步研究 当前第42页\共有63页\编于星期四\20点 二、化学发光分析的基本原理 （一）化学发光反应的基本条件 发光反应必须满足以下条件 1. 化学反应必须产生足够的化学能 化学发光基于化学反应提供足够的能量