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中草药抗菌活性的研究 食品腐败和变质主要是由有害微生物引起的。目前食品防腐保鲜采用的主要是化学合成试剂,如苯甲酸、山梨酸及其盐类等,但有研究表明有些化学合成的食品防腐剂具有致癌、致畸,致突变等毒副作用。随着消费者对食品质量的日益重视,寻求能够替代化学防腐剂的天然食品防腐剂,成为了食品科学研究和应用的一个热点,对天然植物的抗菌活性的研究也取得了一些进展。本实验选取了常用于临床抗菌的十味植物源中草药,并以六株食品中常见污染菌为供试菌,进行体外抗菌试验,从而为天然植物防腐剂开发和应用提供理论。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 中药样品 十味中草药样品均购于北京市前门同仁堂药店,各中草药样品的名称、产地、所用部位及提取方法详见表1。 1.1.2 供试菌株及菌株 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)AS1.89、大肠杆菌(Escherichia coli)AS1.90、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)AS1.1849、啤酒酵母(Saccharomycete)AS2.430、黄曲霉(Aspergillus flavus)AS3.3800及绿色木霉(Trichoderma)3.3711,以上六种供试菌均购于中科院微生物所。 1.1.3 仪器 旋转蒸发器RE-52上海亚荣生化仪器厂;高压灭菌釜MLS-3750日本三洋公司;LRH-250生化培养箱上海一恒科技有限公司。 1.1.4 试剂 乙醇(分析纯);无菌生理盐水依据国标(GB)配制。 1.2 方法 1.2.1 水煎水溶液的制备 取粉碎后的中草药100g于1000ml蒸馏水中,室温浸泡30min后煮沸10min,稍加冷却后过滤得到水煎液;剩余药渣中加入500ml蒸馏水煮沸10min,重复两次;合并两次水煎液,减压蒸馏浓缩至100ml,经121℃灭菌25min后,于4℃冰箱内保存备用,此为100%的水煎药液。 100%药液浓度定义为1g原料提取液浓缩至1ml的浓度。 1.2.2 %乙醇提取水溶液 取粉碎后的中草药50g于500ml的70%乙醇水溶液中,加热回流3 h,稍加冷却后过滤得到粗提取液;通过减压蒸馏去除其中的乙醇,使其浓缩至100ml,经121℃灭菌25min后,于4℃冰箱内保存备用,此为1/2的70%乙醇提取药液。空白样液除用50ml蒸馏水代替中草药外,其余同上。 1.2.3 菌种活化和活化 将各细菌实验菌种分别接种于若干营养琼脂斜面上,于37℃培养24h;将酵母菌和霉菌实验菌种分别接种于若干P D A斜面上,于30℃培养7 2 h,进行菌种活化。 活化后的细菌和酵母,做十倍系列稀释,并活菌计数。活化后的霉菌直接移入适量无菌生理盐水中,充分振荡,制成供试菌液。 1.2.4 菌种和真菌培养 用无菌蒸馏水对药液进行一系列二倍稀释,得到十个系列浓度的药液(1(原液)、l/2、1/4、l/8、l/16、l/32、1/64、1/128、l/256);将药液与琼脂培养基按1:10均匀混合,制成平板,取适量供试菌液进行涂布接种(霉菌采用点接种);细菌于37℃培养24h,真菌于30℃培养7 2 h。 以上药液的浓度均为体积比(V/V)浓度。 2 结果与讨论 2.1 对细菌的活性 十味中草药对真菌的抗菌活性:其浓度为1/10时对黄曲霉均未表现出抗菌活性,只有黄柏和黄芩在浓度为1/20时对啤酒酵母和绿色木霉有抗菌活性,厚朴在浓度为1/40时对啤酒酵母有抗菌活性。十味中草药对细菌的抗菌活性:抗金黄色葡萄球菌活性抗枯草芽孢杆菌活性抗大肠杆菌活性。除川芎外的九种中草药表现出一定抗金黄色葡萄球菌活性,其中黄连和黄芩在浓度小于1/640时仍有活性;对枯草芽孢杆菌,只有川芎和金银花浓度为1/10时未表现出抗菌活性,而黄连在浓度为1/6 4 0时仍有活性;对大肠杆菌,只有黄芩、连翘、厚朴、艾叶和五味子在浓度为1/10到1/80之间时有抗菌活性。 黄芩对黄曲霉外的其它供试菌均表现出一定抗菌活性,并在浓度为1/6 4 0时表现出抗金黄色葡萄球菌活性。黄柏浓度为1/10时对大肠杆菌和黄曲霉未表现出抗菌活性。厚朴浓度为1/10时对黄曲霉和绿色木霉未表现出抗菌活性。黄连在浓度为1/1280时仍对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抗菌活性,但对大肠杆菌未表现出活性。连翘、艾叶和五味子浓度为1/10时对酵母和霉菌未表现出抗菌活性,对供试细菌均有抗菌活性。甘草在浓度为1/20时对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抗菌活性,金银花在浓度为1/80时对金黄色葡萄球菌有抗菌活性,其浓度为1/10时对其它供试菌无抗菌活性。川芎原液对所有供试菌均无抗菌活性。 2.2 空白对照处理 采用70%乙醇对黄芩进行提取,并对提取液进行体外抗菌实验,同时以水和7 0%乙醇溶液分别做空白对照。表3中详细列出