高中生物人教版课件：2-2动物细胞工程第2课时物细胞融合技术与单克隆抗体.pptx

第二章 第2节 动物细胞工程第2课时：动物细胞融合技术与单克隆抗体 1动物细胞融合技术2单克隆抗体的制备目 录二、动物细胞融合技术与单克隆抗体3单克隆抗体的应用 动物细胞融合技术一 一、动物细胞融合技术【自主学习】阅读教材第48页，回答以下问题。《任务一》1.动物细胞融合技术的概念、结果、原理分别是什么？2.动物细胞融合技术常用的诱导方法有哪些？3.动物细胞融合技术有何意义？在现实生活中的应用有哪些？ 1.概念：使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。2.结果：形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。3.原理：细胞膜具有一定的流动性4.诱导融合的常用方法：PEG融合法电融合法灭活病毒诱导法动物细胞融合细胞膜的流动性细胞增殖一、动物细胞融合技术动物细胞培养 5.意义：突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 6.应用：(1)细胞融合技术已经成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。(2)利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。一、动物细胞融合技术 仙台病毒紫外线灭活丧失感染活性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）1.什么是病毒的灭活？灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。诱导融合的常用方法：相关信息 病毒表面的糖蛋白和一些酶与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。2.灭活病毒诱导细胞融合的原理诱导融合的常用方法：相关信息 植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜具有一定的流动性、植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能动物细胞融合技术与植物体细胞杂交的比较 单克隆抗体的制备二 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。早期获得抗体的方法资料1为解决这一难题，科学家进行了多年的研究和探索。产量低、纯度低、特异性差 资料2人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的浆细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个浆细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用克隆单个B淋巴细胞形成细胞群。每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体B淋巴细胞不可能无限增殖如何获得大量、单一的抗体？遗憾的是体外培养时，一个B淋巴细胞不能无限增殖如何解决这一问题？B淋巴细胞不可能无限增殖 动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养单克隆抗体杂交瘤细胞既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体1975年，英国科学家米尔斯坦和德国科学家科勒在前人工作的基础上，充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案：资料3一个极富创造力的方案 1.为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？2.会有几种细胞融合方式（只考虑两个细胞融合）？ 3.杂交瘤细胞是如何筛选出来的？4.是否所有的杂交瘤细胞都能产生专一性抗体？5.有几次筛选过程？目的是什么？6.如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？二、单克隆抗体及其应用《任务二》阅读图2-16,结合图2-16: 米尔斯坦和科勒制备单克隆抗体过程的示意图，尝试构建制备单克隆抗体带流程，并思考以下问题： 从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养多种已免疫B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合小鼠的脾脏中获取1.单克隆抗体的制备过程注射特定的抗原,小鼠脾产生特定抗体的淋巴B细胞 16022杂交瘤细胞(多种)13置于选择性培养基上培养 第一次筛选融合的细胞BBBB瘤瘤瘤 瘤 1.单克隆抗体的制备过程B瘤B瘤第一次筛选：用特定的选择培养基在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长 02克隆化培养抗体检测第二次筛选(抗原-抗体杂交技术)能分泌所需抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞(多种)1.单克隆抗体的制备过程抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（分泌的抗体能和特定的抗原结合） 1802体外培养单克隆抗体体内或体外培养能分泌所需抗体的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔1.单克隆抗体的制备过程 ①细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基喋呤阻断。②人淋巴细胞中有这两种DNA的合成途径，但不能分裂增殖。 ③鼠骨髓瘤细