DB33T537动物组织中莱克多巴胺的测定行业资料畜牧.docxVIP

ng）m——取样量（g）n ng）m——取样量（g）n——稀释倍数测定结果用平行测定的算 样中游离的莱克多巴胺，然后用固相萃取柱净化，BSTFA（双三 试剂盒说明书操作。55试剂和溶液5.1除非另有说明，本法所用 机。6.4微量加样器及配套吸头：20μL,50μL,100μ DB33 ICS ICS 65.120 B 46 备案号： 浙 江 省 地 方 标 准 DB33/T 537 —2005 动物组织中莱克多巴胺的测定 Determination of ractopamine in animal tissue 2005-02-17 2005-02-17发布 2005-03-18实施 浙江省质量技术监督局 发布 . . . 所需浓度。16.6甲苯。16.7其它仪器，同11 所需浓度。16.6甲苯。16.7其它仪器，同11。16.8其 子倍增器电压：1506V。....质量扫描围：30～550U 二抗体（5.7）37℃孵育30分钟后倒出孔中的液体，将微孔架 个孔的平行重复，记录标准和样品的位置。加入50μL的标准品和 前 言 本标准由省农业厅提出并归口。 本标准由省畜产品质量安全检测中心、 省疾病预防控制中心负责起草， 一星集团饲料有限责任公司 参与起草。 本标准主要起草人：吴平谷、应永飞、朱聪英、陆春波、林仙军、勇、周文海、浦琴华。 . . . 程中，操作步骤可根据试剂盒使用说明书略作调整。7.2样品处理.1。17.2 程中，操作步骤可根据试剂盒使用说明书略作调整。7.2样品处理 .1。17.2试样净化同HPLC法11.2。17.3试样衍生 倒置在洗水纸上拍打（每轮拍打3次）以保证完全除去孔中的液体， 。保护柱：C18柱，长20mm，径3.9mm，粒径5μm，或 动物组织中莱克多巴胺的测定 1 围 本标准规定了以酶联免疫（ ELISA）法、高效液相色谱（ HPLC）法和气相色谱－质谱（ GC－ MS）法 检测动物组织中莱克多巴胺的方法，规定GC－ MS法为仲裁法。 本标准适用于动物组织中莱克多巴胺的测定。 酶联免疫（ ELISA）法为筛选方法，检测限为5 μg/kg ，高效液相色谱（ HPLC）法和气相色谱－质谱 （GC－ MS）法为定量方法，定量限HPLC法为5 μg/kg 、GC—MS法为1 μg/kg 。线性围：酶联免疫（ ELISA） 法为0.005ng-0.05ng ，高效液相色谱（ HPLC） 法为2.5ng-10ng ，气相色谱－质谱（ GC－ MS）法为 0.05ng-1.0ng 。 2 规性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。 凡是注日期的引用文件， 其随后所有的 修改单 （不包括勘误的容）或修订版均不适用于本标准， 然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是 否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 试样制备 肌肉、肝脏、肾脏等动物组织，去筋后切成小块，制成肉糜后，于－ 18℃以下温度冷冻保存。 第一法 酶联免疫法 4 原理与方法 4.1 原理 本测定方法是酶联免疫法中的竞争性测定法， 其主要原理是： 吸附在孔的莱克多巴胺与标准或样品 中的莱克多巴胺竞争性地与莱克多巴胺抗体相结合，与标准品或样品相结合的莱克多巴胺抗体被洗涤去 除后， 只剩下与微孔药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的第二抗体相结合，酶底物在酶作用下产 生蓝色产物， 吸光度的高低与样品中莱克多巴胺的含量成反比。 4.2 方法 采用莱克多巴胺酶联免疫试剂盒或类似产品，按试剂盒说明书操作。 5 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水巍去离子水， 符合 GB/T 6682 二级水的规定。 5.2 PBS缓冲液：用水 10 倍稀释厂商提供的浓缩 PBS缓冲液。 5.3 工作洗液：用水 20 倍稀释厂商提供的浓缩洗液。 5.4 乙酸乙酯。 5.5 碳酸盐缓冲液： 称取 4.3g 碳酸钠（ C O）， 2.9g 碳酸氢钠（NaHC ）， 加水至 1000mL， 摇匀，调节 pH值至 9.5 。 5.6 提取液： 取 10mL甲醇，加 90mLPBS缓冲液， 摇匀。 5.7 甲醇。 . . . 与标准或样品中的莱克多巴胺竞争性地与莱克多巴胺抗体相结合，与l莱克多巴胺贮备液（10.16.1），置50mL 与标准或样品中的莱克多巴胺竞争性地与莱克多巴胺抗体相结合，与 l莱克多巴胺贮备液（10.16.1），置50mL棕色容量瓶中 682二级水的规定。10.2乙腈：色谱纯。10.3甲醇。10 10.122％乙酸溶液：5mL