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不同大豆品种质量分析 一、[实验目的] 决定大豆质量的主要指标是蛋白质和油脂含量。东北师范大学生命科学学院苗以农教授从事大豆育种的科学研究工作四十余年。本实验以苗以农教授提供的几种大豆育种材料为研究对象并完成以下学习目标： 学习凯氏定氮测定蛋白质含量的原理和操作技术； 学习标准溶液配置与标定的原理与操作； 规范分析化学的基本操作技能（电子天平、容量瓶、移液管等仪器的使用方法）； 学习利用索氏提取器及减重法测定大豆粗脂肪的含量； 掌握误差与分析数据处理的相关知识； 学习有机溶剂的回收的方法（简易蒸馏装置、旋转薄膜蒸发仪、真空泵的使用）； 7.6molHCl 将蛋白质水解为氨基酸以及氨基酸衍生物的前处理方法； 8.了解利用高压液相色谱法HPLC 测定大豆氨基酸组成的原理和方法。 实验 大豆粗脂肪的提取和定量分析 一、[实验原理] 用有机溶剂和索氏提取器可以循环抽提样品中的脂溶性物质的混合物。 由于大豆中含有脂肪、游离脂肪酸、固醇、芳香油、某些色素及有机酸等，因此称为粗脂肪。 本实验就是利用有机溶剂石油醚和索氏提取器循环抽提大豆中的粗脂肪。 二、[仪器与试剂] 1.实验试剂与原料 （1）大豆粉 （2）石油醚 2.用品与仪器 （1）索氏提取器 （2）电子天平 （3）烧杯 （4）烘箱 （5）干燥器 （6）恒温水浴 （7）脱脂滤纸 （8）脱脂棉 （9）镊子 三、[操作方法] （一）样品处理 粉碎：在研钵中研碎大豆样品，研磨后钵体用脱脂棉擦挣，并放入提取漏斗，研钵用少量乙醚洗净，装入提取管。 烘干与称重：将大豆样品在110℃烘箱内烘干至恒重，冷却后称取5-6g 样品，记下 样品质量m 。 0 将大豆样品放入脱脂滤纸做成的提取漏斗中，放在盛有CaCl 真空干燥器中干燥，称 2 量大豆样品和滤纸的质量和m 。 1 （二）提取 索氏提取器的安装 将洗净的提取瓶在 105℃的烘箱内烘干至恒重，加入用 CaCl 干燥的石油醚至抽提瓶容 2 积的 1/2，将大豆样品包置于抽提管内，然后依照下图连接实验装置。 提取过程 加热恒温水浴，使石油醚蒸发。石油醚蒸汽由连接管上升至冷凝器，凝结成液体， 滴入提取管中，样品内的脂肪被石油醚所抽提。 石油醚液面高于虹吸管高度后，溶有脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。 循环抽提，调节水浴温度，控制石油醚从冷凝器滴入滤纸筒内的速度为150dpm， 使石油醚循环 10-20tpm。 从提取管内吸取少量石油醚滴在干净的滤纸上，石油醚蒸干后，滤纸上不留有油 脂的斑点，说明抽提已经完毕。 抽提完毕后，冷却，使提取器倾斜，石油醚流回提取瓶中。. 取出滤纸包，干燥至恒重，称其质量m 。 2 利用旋转薄膜蒸发仪回收石油醚 数据计算 称量名称数值 称量名称 数值 所称大豆样品质量m 0 抽提前大豆样品和滤纸的质量m 1 抽提后大豆样品和滤纸的质量m 2 计算结果（粗脂肪%） 参考数值 注意事项 将滤纸筒放入索氏提取器的提取管内时，不能高于虹吸部分。 提取管磨口连接部分不能涂凡士林，但不能漏气。 加热抽提时，应在电热恒温水浴中进行，不能使用火焰加热的水浴锅。 实验 凯氏定氮法测定蛋白质的含量 一、[实验原理] 实验室常用凯氏定氮法测定天然有机物（如蛋白质、核酸、氨基酸）的含氮量。 1.标定 NaOH 固体中含有Na CO 杂质，而且容易吸湿；盐酸易挥发，准确浓度不确定，因 2 3 此 NaOH 与盐酸均不能直接配成准确浓度的溶液，而必须先配成一个近似浓度的溶液，再用标准溶液来标定。 由于 KHC H O（邻苯二甲酸氢钾，物质的量为 204.22）稳定，又可以与 NaOH 反应， 8 4 4 可用于标定NaOH 的摩尔浓度，进而标定盐酸的摩尔浓度。2.消化 含氮有机物与浓硫酸共热时，其中的碳和氢两种元素被氧化成二氧化碳和水，而氮则转化成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵，此过程称为消化。由于反应比较缓慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高反应液的沸点，并加入硫酸铜或过氧化氢作为催化剂。例如：甘氨酸的消化过程如下： CH NH COOH+3H SO →2CO ↑+3SO ↑+4H O+NH ↑ 2 2 2 4 2 2 2 3 2NH +H SO →(NH ) SO 3 2 4 4 2 4 蒸馏 浓碱可以使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量、浓度硼酸溶液中，硼酸吸收氨后溶液中的氢离子浓度降低。 (NH ) SO +2NaOH=Na SO +2H O+2NH ↑ 4 2 4 2 4 2 3 H BO （粉红色）+3NH =(NH ) BO （鲜绿色） 3 3 3 4 3 3 滴定及计算 用标准盐酸滴定，恢复溶液中原来氢离子浓度。 根据所用标准盐酸的摩尔数计算出待测液的总氮量。 3HCl+(NH ) BO =3NH Cl+H