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碱提取酸沉淀法提取菊花米中芦丁的研究 lu丁，又名玉香甾醇，其化学结构为5、7、3、4、二苯基和3-玉香糖黄酮。它对心血管系统疾病的预防和治疗效果也很好。可采用的提取方法有浸渍法、有机溶剂提取法、碱提酸沉法、连续萃取法和微波法等,其中以碱提酸沉法最为常用。故本文对芦丁提取的关键步骤碱提取和酸沉淀最适pH值做一探讨,以提高芦丁的提取效率,避免资源浪费。 1 材料和方法 1.1 循环水试药、仪器 芦丁标准品购自中国药品生物制品检定所,批号:0080-9705;槐花米购自大连美罗大药房;SHZ-3型循环水真空泵,河南巩义市英峪华中仪器厂;UV-2401紫外分光光度计,日本岛津公司;pHS-3C型酸度计,上海雷磁仪器厂;FA1004型电子天平,上海精密科学仪器有限公司。所用试剂均为分析纯。 1.2 方法 1.2.1 u3000酸、碱分别预处理不同的ph值 每只烧杯取芦丁20 g,粗研,加入用石灰乳调制的不同pH值(pH8、pH9、pH10)的碱液300 mL,同时加入硼砂1 g,加热至微沸30 min,趁热抽滤,滤液加入浓HCl调至不同的pH值(pH1、pH2、pH3、pH4、pH5),放置过夜。抽滤后得芦丁粗品,置红外灯下干燥,然后用蒸馏水按1 g∶200 mL的比例进行重结晶,放置过夜,滤取沉淀并干燥。 1.2.2 isa-h定性反应 取芦丁的乙醇液分别进行Mg-HCl,ZrOCl2/枸橼酸及Molish定性反应;取芦丁及其标准品的乙醇溶液进行TLC鉴别;取芦丁的甲醇液用诊断试剂NaOMe,AlCl3/HCl,NaOAc/H3BO3,在200～500 nm波段内进行扫描,进行UV光谱鉴别。 2 结果 2.1 提纯率低,比例少 实验发现碱提取pH 10,酸沉pH 2时,芦丁粗提率可达20.7 %,但提纯率只有14.2 %;而碱提pH 9,酸沉pH 3时,粗提率为20.2 %,但提纯率却可达18.1 %。pH值与芦丁得率的关系见表1。 2.2 zrocl2和枸杞酸对样品的提取 Mg-HCl和Molish反应均呈阳性;样品在ZrOCl2加入后显黄色,再加入枸橼酸后黄色褪去。TLC中样品只有一个斑点出现如图1,Rf值与芦丁标准品一致。提取的芦丁各种UV光谱数据见表2。 3 碱提酸沉法提取芦丁的效率 芦丁含有7-,4′-等4个酚羟基易溶于碱液,而槐花米中的其他成分如白桦脂醇、槐二醇、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等无酚羟基,与槐花米中的多糖类一样,不溶于碱液,故用碱提酸沉法将芦丁从其他成分及杂质中很好地提取并分离出来,因此,碱提酸沉法在提取芦丁等含酚羟基较多的黄酮类化合物时较其他方法高效、便捷。本研究发现碱提pH 10、酸沉pH 2时,粗品得率为20.7%,纯品得率为14.2%;而碱提pH 9、酸沉pH 3时,粗品得率为20.2 %,纯品得率为18.1%,表明酸碱浓度适宜,则可提高芦丁产率;而碱提pH值偏高,酸沉pH值偏低,虽然可以提高粗提率,但杂质含量较高,同时发现这一条件较前者能加快反应速度。因此从反应速度与纯品得率两方面考虑,槐花米中芦丁的提取可选用碱提pH 9、酸沉pH 2的酸碱度。