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三维有序大孔金膜修饰电极的制备及其对h 1 无酶传感器的s10 回收天竺葵（b2o2）广泛应用于食品行业、临床应用和环境分析领域。同时,它也是包括葡萄糖氧化酶、尿酸酶、胆固醇氧化酶、醇氧化酶、肌氨酸氧化酶、半乳糖氧化酶以及L-氨基酸氧化酶等在内的一系列酶促反应的重要副产物。因此,发展可靠、灵敏、快速、低成本的H2O2检测方法具有重要意义。目前,H2O2检测方法包括滴定法、光谱法、荧光法、化学发光法、色谱法及电化学法[9~15]。其中,电化学法,尤其是基于各种过氧化物酶[11~13]和血红蛋白的电流型生物传感器研究最为广泛,因为它们具有操作简便、高效、高灵敏度和高选择性等优点。然而,酶所固有的稳定性不佳、易失活的特点在一定程度上限制了该类传感器的应用。因此,基于无酶传感器的H2O2检测逐渐引起人们的兴趣。目前,普鲁士蓝、硫堇以及铂、银、氧化铜、氧化钴等金属、金属氧化物纳米材料都已被成功应用于H2O2无酶传感器的构建。以反相晶体模板技术制备的三维有序多孔结构材料具有开阔的、相互连接的周期性结构,有利于反应物与其表面活性位点的接触,因而具有更高的活性比表面,有利于进行无酶传感器的研究。 本研究以垂直沉积法制备的三维有序排列的硅球为牺牲模板,利用电化学沉积法构建了三维有序大孔金膜修饰电极,并将其应用于H2O2无酶传感的研究,线性范围为1×10-6~5.5×10-5mol/L和8×10-5~1.3×10-3mol/L,检出限为3.3×10-7mol/L。此传感器具有良好的稳定性和重现性。 2 实验部分 2.1 工作电极及试剂 CHI 660A电化学工作站(上海辰华仪器公司)。三电极系统:工作电极为三维有序大孔(3DOM)金膜修饰电极(3DOM/Au/CME);对电极在电化学沉积金过程中为铂片电极,其它过程为铂丝电极;参比电极为饱和甘汞电极(SCE)。所有的电位均相对于SCE而言。工作电极的几何面积(0.07 cm2)通过一张打孔的覆盖在三维有序排列Si O2球层上的绝缘胶带控制。单分散Si O2球(直径500 nm,Alfa Aesar公司);氯金酸(Au Cl3·HCl·4H2O,上海化学试剂有限公司);HCl O4,H2SO4和HF(南京化学试剂有限公司);H2O2(30%,国药集团化学试剂有限公司);磷酸盐缓冲液(PBS,100 mmol/L,由Na H2PO4和Na2HPO4配制)。所用试剂均为分析纯,实验用水为Millipore纯水系统制备的超纯水(电导率18 MΩcm)。 2.2 sio2抗体的制备 电极的制备参照文献。首先,将石英基底的金片电极依次浸于乙醇、丙酮及水中,超声清洗15 min,再将其垂直悬挂于一定浓度的Si O2悬浮液(0.35 g Si O2纳米球超声分散于60 m L水-乙醇混合溶液(1∶9,V/V))中,整个体系保持在35℃直至溶剂完全挥发,再在氮气保护下于250℃煅烧2 h,从而得到三维有序排列的Si O2胶体晶体模板。将电极浸入由0.1%(w/w)HAu Cl4和0.1 mol/L HCl O4组成的电解液中,于氮气氛围下在0.5 V进行恒电位沉积,电量控制为0.06 C。最后,用5%HF溶解Si O2胶体模板,从而得到三维有序大孔金膜修饰电极。将此电极置于0.5 mol/L H2SO4中,用CV法(0~1.6 V)活化30 min,直至获得稳定的CV曲线。 3 结果与讨论 3.1 金电极的cv行为特征 在0.5 mol/L H2SO4溶液中对修饰电极进行了电化学表征,如图1所示。3DOM/Au/CME具有典型的金电极的CV行为特征,起始于1.1 V附近的两个氧化峰均为金的氧化峰;起始于0.9 V附近的还原峰为金氧化物的还原峰。根据其电化学还原过程的电量可以计算得到此修饰电极的有效面积为0.65 cm2,与之相应的表面粗糙因子为9.3,即相对于普通的平面金片电极,3DOM结构具有更大的活性比表面,可以用于电化学传感器的构建。 3.2 工作电位对修饰电极电化学 采用CV法研究了此修饰电极对H2O2的电化学催化行为,如图2所示。在空白的缓冲溶液中,修饰电极的CV曲线近似为平坦的直线(曲线a);而当在底液中加入0.1 mmol/L H2O2后,其阴极电流明显增大(曲线b)。由此可见,阴极电流的变化是修饰电极电催化还原H2O2的结果。 从修饰电极对H2O2响应的CV实验可见,修饰电极所产生的还原电流与检测电位密切相关。为确定对H2O2进行安培检测的最佳工作电位,在PBS(p H 7.0)中研究了工作电位对修饰电极电流响应的影响,如图3所示。修饰电极对H2O2的电催化还原电流起始于-0.1 V,随着工作电位的负移,电流响应逐渐增大。这是由于电位的负移促进了H2O2还原。本实验最终选择-0.4 V作为安培检测