三维培养基质中肿瘤细胞间充质式迁移和巴特式迁移模式的研究进展.docxVIP

三维培养基质中肿瘤细胞间充质式迁移和巴特式迁移模式的研究进展 间充质式迁移 细胞移植不仅是细胞开展各种重要生理活动的基础，也是炎症反应和肿瘤形成等病理过程的重要步骤和重要因素的重要因素。 通常细胞迁移由整合素介导, 整合素介导细胞黏附于胞外基质(extracellular matrix, ECM),提供细胞骨架与ECM之间的物理连接, 并通过诱发细胞收缩促使细胞极化伸长, 同时整合素激活可招募蛋白水解酶聚集于黏附局部, 水解酶与ECM相互作用可促使基质纤维降解和重组, 从而降低基质对运动细胞的阻力以利导其移动, 这就是所谓的间充质式迁移。间充质式迁移的推进依赖整合素介导的黏附和水解酶消除物理障碍的协同作用。离体和在体检测发现肿瘤细胞多高表达基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs), 如MMP-2、-9、-13、-15、-17等。 然而, Wyckoff等在动物肿瘤模型和人类临床试验中发现使用MMPs和丝氨酸蛋白酶(serine proteases)抑制剂后肿瘤细胞仍保持显著的运动能力,表明ECM降解酶不是肿瘤细胞运动和浸润所必须的, 应用高清晰活细胞成像技术发现: 当基质水解酶被抑制后, 肿瘤细胞可采用另一种非蛋白酶依赖的迁移模式, 即通过收缩挤压自身变形来促使细胞穿过胞外基质间隙, 这就是所谓的阿米巴式迁移。实验观测发现肿瘤细胞侵袭过程中, 两种迁移模式可以相互转化以适应周围环境的变化, 两者的灵活转换大大增强了肿瘤细胞的迁移浸润能力, 因此也增加了治疗肿瘤时控制癌细胞恶性转移的难度。 1 肿瘤细胞转移 1.1 微路径边缘运动非官路径的真理变化检测细胞向邻近正常组织扩散 通常对细胞迁移的经典描述包括如下5个步骤:①由肌动蛋白多聚化引起细胞极化和前端伪足扩张; ②伪足与ECM配体连接, 信号和骨架相关蛋白集中于黏附位点, 形成粘着斑;③细胞前端的胞外基质降解; ④整合素受-配体结合, 诱发肌动蛋白和肌球蛋白Ⅱ(myosin Ⅱ)交联与收缩;⑤细胞体向前滑动, 尾部回缩。进行间充质式迁移的细胞遵循5步迁移规则, 其中有两个环节至为关键, 即整合素的胞内结构域可诱发骨架装配和收缩促使细胞形成梭形, 并在细胞两端产生高收缩力, 同时其胞外结构域可招募MMPs在局部聚集, MMPs一是通过降解ECM为肿瘤细胞向前运动清除物理障碍, 二是切断受-配体连结利于尾部回缩, 从而构成间充质式迁移的限速步骤。 应用高精度多模态显微镜观察MMPs如何促进癌细胞向邻近正常组织扩散过程发现: MMPs对胶原纤维进行剪切并将它们重新排列为平行的纤维束, 单个细胞就沿这些微路径在ECM上迁徙, 在微路径边缘运动的细胞可使基质纤维向外扩展而产生更大的允许群体细胞迁移的管状路径, 当更多细胞相继沿着新产生的路径运动时, 由前自后形成接触引导式的群体迁移现象。 整合素介导的黏附作用是细胞进行间充质式迁移的基础,因而整合素的代谢过程也会极大地影响细胞的间充质式迁移行为。Caswell等监测到整合素的运输代谢过程, 整合素二聚体不断从质膜被胞吞到内含体组件, 通过微管运输再胞吐到细胞表面, 从而完成胞吞-胞吐循环, 这是一个高效的过程,质膜池的整合素仅需30 min就能循环一次。整合素的这一循环利用机制, 使细胞尾部脱黏附与前端新生黏附位点间的整合素以更替相续的方式来支持细胞的运动行为。最近Eileen等的研究显示: 整合素循环与整合素-骨架分子路径上的机械力传导有关, 因整合素耦联胞内-外骨架, 使细胞运动过程中其骨架动力学变化产生的机械力经由整合素-骨架传导的同时, 可通过影响整合素分子内的构象改变来调控局部黏附复合物的结合亲和力, 即稳定黏附与快速释放可能依赖骨架应力的作用。 高方向性是细胞间充质迁移的另一个鲜明特征。在持续方向上迁移的细胞需要形成占显著优势的伪足,当迁移细胞受到趋化剂或ECM的刺激后, 在接触面上将局部信号放大, 这些信号调节肌动-球蛋白骨架重组,使细胞形态极化并产生伪足扩张。在与基质相互作用的黏附细胞中, Rho促进整合素β1与基质快速结合, 并稳定整合素-基质的连接, 增加黏附斑的面积和力量。由于黏附斑的形成和翻转发生在10～120 min的时间尺度内, 最终导致细胞在三维基质内的迁移具有高的方向持续性和相对较低的迁移速率(0.1～0.5 μm/min)。 1.2 细胞内部组织化学 以上5步迁移模型并不能覆盖所有的迁移形式, 在体或三维培养环境中细胞还会以另一种更有效的方式即阿米巴运动来迁移。细胞模仿单个阿米巴Dictyostelium discoideum的运动特征。Dictyostelium是一种椭圆形细胞, 通过一种或几种非-整合素受体以较低结合力与胞外配体结合, 且具有高速变形性, 在几