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第 1-4 章 1. 生物工程的基本过程。 2.生物反应器:各种细胞及其代谢产物的生产过程都要通过细胞的培养，而细胞的培养 所用的装置就是生物反应器。 3.动物细胞培养方式。 贴壁培养、悬浮培养、固定化培养 第五章 ⒈目标产物分离纯化路线包括哪两个基本阶段？ 产物的初级分离、产物的纯化精制 ⒉细胞破碎按照是否存在外加作用力可分为哪两类？每类中有哪些常见类型？ 机械法和非机械法。机械法：高压匀浆法、高速珠磨法 非机械法：化学渗透法、 酶溶法 ⒊高压匀浆法破碎细胞的作用机理是什么？要提高破碎率可采取什么办法？该法温控 与能耗如何？存在的主要问题是什么？ 机理：从高压室压出的细胞悬浮液经过阀座的中心孔道从阀座和阀杆之间的小环隙中 1 喷出，速度可达几百米每秒。这种高速喷出的浆液又射到静止的碰撞环上，被迫改变方向 从出口管流出，细胞经过一系列的高速流的剪切、碰撞、以及从高压到常压的变化。使细 胞产生较大的形变，导致细胞壁的破坏。 方法：增加压力或增加破碎次数 能耗：能耗主要包括提供动力消耗的能量以及低温操作消耗的能量。 存在问题：较易造成堵塞的团状或丝状真菌以及较小的革兰氏阳性菌不适合用此法 ⒋高速珠磨法破碎细胞的作用机理是什么？该法温控与能耗如何？ 微生物细胞悬浮液与极细的研磨剂在搅拌桨作用下充分混合，珠子之间以及珠子和细 胞之间的相互剪切碰撞，使细胞壁破裂 ，释出内含物。 能耗：采用夹套冷却的方式实现温度控制的，一般情况下能够将温度控制在要求范围 内。能耗与细胞破碎率成正比。 ⒌比较高压匀浆法和高速珠磨法的特点。 高压匀浆法：操作参数少 ，易于确定。 高速珠磨法：操作参数多 ，一般凭经验估计。 ⒍超声破碎机理及存在的问题分别是什么？ 2 机理：声频高于 15—20KHz 的超声波在高强度声能输入可以进行细胞破碎，其破碎 机理尚未弄清楚，可能与空化现象引起的冲击波和剪切力有关，空化现象是强声波作用下， 让气泡形成，胀大和破碎的现象。 存在问题：超声波产生的化学自由基能使某些敏感活性物质变性失活，噪声令人难以 忍受，而且大容量装置声能传递，散热均有困难。 ⒎何谓化学渗透法？其作用机理是什么？该法常用的化学试剂有哪几类？该法与机械 法比较有何优缺点？ 某些有机溶剂抗生素、表面活性剂、金属螯合剂、变性剂等化学药品都可以改变细胞 壁或膜的通透性，从而使内含物有选择性的渗透出来。 类型 ：EDTA 作为螯合剂、 甲苯（有机溶剂 ）、Trition X-100 （非离子型清洁剂 ） 优点：1、对产物释出具有一定的选择性 2、细胞外形保持完整 ，碎片少 ，利于后分 离 3、核酸释出量少 ，浆液粘度低 ，便于进一步提取 缺点：1、时间长 ，效率低 2、化学试剂具有毒性 3、通用性差 ⒏何谓酶溶法？其作用机理是什么？该法有何优缺点？ 用生物酶将细胞壁和细胞膜消化溶解的方法。 机理：具有高度的专一性，蛋白酶只能水解蛋白质，葡萄糖酶只能对葡萄糖有作用， 因此溶酶系统处理细胞必须根据细胞的结构和化学组成选择适当的酶 ，并确定相应的使用 3 次序。 优点：选择性释放产物，核酸泻出少，细胞外形完整 缺点:价格高，通用性差 ⒐细胞破碎技术研究的发展方向是什么？ 1、多种破碎方法相结合 2、与上游过程相结合 3、与下游过程相结合 ⒑什么是包含体？ 人工进行细胞破碎来释放产物，而且相当多的蛋白质产物在胞内凝集成没有活性的固 体颗粒 11.蛋白质复性方法有哪些？ 稀释复性和透析复性 色谱复性 凝胶过滤复性 金属螯合色谱复性 亲和色谱复 性 12.离心分离的原理是什么？离心沉降速度受哪些因素影响？按分离因素大小离心分 哪几类？ 原理：固体和液体之间的密度差