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不同提取方法对全蝎镇痛、镇静、抗惊厥作用的影响 蝎子是中医学中常用的动物性药物之一。它是平肝祛风药。它的味道又辛又苦，味道很重。具有祛风、镇痛、攻毒结止痛、通络止痛的功效。用于治疗空气风暴、半身体不适、寒风僵硬、儿童痉挛、痉挛和艾哈巴氏病毒等疾病。全蝎在临床使用上多采用煎煮法入药,在民间则多采用酒泡的方式使用。本实验中对全蝎冷浸、热水提、醇提三种不同提取方法的提取液进行镇痛、镇静、抗惊厥作用对比研究,为临床用药提供参考。 1 材料和方法 1.1 实验动物 昆明种小鼠,体重(20±2)g,购自安徽医科大学实验动物中心,合格证号:SCXK(皖)2005-0001。 1.2 热板仪器和药品 全蝎药材购自萧县华鑫特种动植物养殖有限公司,均为成年蝎。经安徽中医学院药学院方成武教授鉴定为节肢动物门蛛形纲钳蝎科动物东亚钳蝎(Buthus martensii karsch)。安定(山东省平原制药厂,101005);戊四唑(PTZ,Sigma公司);阿司匹林片(阿斯利康制药有限公司,201008007);苯巴比妥钠(上海新亚药业有限公司,100608)。RB-200智能热板仪(成都泰盟科技有限公司);BS-224S电子天平(北京赛多利斯仪器公司);旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司);SHB-Ⅲ循环式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。 1.2 试验溶液的制备 在参照文献的基础上,通过正交设计法对全蝎的冷提、热提、醇提工艺运用进行了优化设计,样品的制备工艺如下。 1.2.1 浸提液制备液 精密称取冻蝎(活体冻死)10 g,加4倍量蒸馏水,冷浸4 d,共浸提2次,合并第1、2次提取液,将合并液滤过,滤液用蒸馏水定容至100 mL,放置于冰箱冷藏室待用。 1.2.3 合并液浓缩液制备 精密称取冻蝎10 g,加4倍量60%乙醇,提取1 h,共提取3次,合并第1、2次提取液、将合并液与第3次提取液趁热滤过,滤液于60℃减压浓缩至5 mL左右,放入蒸发皿中蒸发剩余的乙醇,待无乙醇气味后用蒸馏水定容至100 mL,放置于冰箱冷藏室待用。 1.3 方法 1.3.1 给药及剂量 取小鼠200只,每组实验各用50只小鼠。将每50只小鼠,随机分为5组,每组10只,5组分别为:正常对照组(蒸馏水)、药物组、样品组(冷浸液、水煎液、醇提液)。阿司匹林药物组给药量为0.2 g/kg,安定药物组给药量为0.004 g/kg,苯巴比妥钠药物组给药量为0.05 g/kg,四组实验中样品组给药量均为2 g/kg(生药浓度)。每天灌胃1次,连续灌胃7 d。上述药物均用蒸馏水进行稀释。末次给药前8 h禁食不禁水。 1.3.2 实验方法 1.3.2. 1.热板试验方法 第7天灌胃给药60 min后,将小鼠置于(55.0±0.5)℃热板上。从放入热板到其舔后足的时间,为小鼠痛反应时间。 1.3.2. 小鼠一次扭体次数的测定 第7天灌胃给药60 min后,腹腔注射0.6%醋酸(使用前配制)0.2 m L/只。注射醋酸后立即记录小鼠15 min内扭体次数。一次扭体的标准是小鼠身体拉长,腹部肌肉张力增高,前肢伸展,并伴有一侧或两侧后肢伸直。实验结果可根据以下公式计算抑制率:抑制率=(对照组平均扭体次数-实验组平均扭体次数)×100%/对照组平均扭体次数。 1.3.2. 活动次数的测定 第7天灌胃给药60 min后,将小鼠置于自主活动记录仪中,使其适应5 min后开始记录随后5 min内的活动次数。自主活动抑制率(%)=(空白组活动次数-药物组活动次数)/空白组活动次数×100%。 1.3.2. 小鼠阵肌性惊厥的观察 末次给药60 min后,腹腔注射浓度为100 mg/kg的PTZ诱发惊厥,观察30 min,记录小鼠阵挛性惊厥的的潜伏期、死亡率。以动物给药后至出现惊厥为惊厥潜伏期,观察并记录各组小鼠的惊厥潜伏期和死亡小鼠数。阵挛性惊厥以小鼠前肢阵挛为指标,发生惊厥的潜伏期为从给PTZ开始到小鼠第1次出现阵挛性惊厥的时间。 1.4 统计处理 运用Originpro7.0统计软件分析,进行正态分布和方差检验,结果以表示,组间进行t检验。 2 结果 2.1 小鼠热板痛行为 小鼠热板痛阈值结果见表1、图1。给药前各组间小鼠热板痛阈值无显著性差异,给药后冷浸组、阿司匹林药物对照组小鼠热板痛阈值与空白组相比,药效差异有统计学意义(P0.01),且冷浸组的痛阈提高率明显高于热提组和醇提组。 实验结果表明全蝎冷浸、热提、醇提的提取物都能延长小鼠舔足潜伏期,一定程度上抑制热板反应,以冷浸法提取的提取液镇痛效果更为显著。 2.2 小鼠扭体次数和抑制率 小鼠醋酸扭体次数结果见表2、图2。给药后能有效减少醋酸诱发的小鼠扭体反应,其中冷浸组和阿司匹林药物对照组小鼠扭体次数与空白组相比药效显著(P0.01),阿司匹林组和