稳定表达软骨调节素I的大鼠MSCs细胞株的建立的中期报告.docxVIP

稳定表达软骨调节素I的大鼠MSCs细胞株的建立的中期报告 目前我们已经完成了稳定表达软骨调节素I（TGF-β1）的大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的基因转染，并通过药物筛选和单克隆筛选确立了TGF-β1表达稳定的MSCs细胞株。 在基因转染的过程中，我们首先设计并合成了包含TGF-β1基因序列和荧光素素报告基因序列的转染质粒。然后将转染质粒通过盐酸乙酰胆碱（HAEC）介导的转染技术导入到大鼠MSCs中，并通过荧光显微镜观察转染效果。接着，我们通过G418耐受性筛选和外形观察初步筛选出表达TGF-β1的细胞，再通过Western blot和ELISA等鉴定方法确立稳定表达TGF-β1的MSCs细胞株。 在药物筛选阶段，我们使用多种细胞因子和生长因子，包括TGF-β1，FGF2，BMP2和IGF-1等，对TGF-β1表达的MSCs细胞株进行培养。结果显示，TGF-β1能够显著增强MSCs细胞株的增殖和表达软骨基质蛋白的能力。因此，我们选择TGF-β1作为进一步单克隆筛选的培养因子。 最终，通过单克隆分离，并通过Western blot、ELISA和mRNA检测等方法鉴定，我们成功确立了表达TGF-β1稳定的MSCs细胞株，并验证了其可以表达高水平的软骨基质蛋白。这为进一步研究MSCs在软骨修复中的应用提供了有力的细胞学基础。