蛋白酶k实验检测报告.docVIP

重组蛋白酶K质量检测报告 实验检测报告一 ：蛋白酶k消化荧光素酶 实验原理：荧光素酶在荧光素和ATP等物质存在的条件下可以发出荧光，当荧光素和ATP都过量时，发光强度与荧光素酶的活性有关，用绿邦产的ATP检测仪可测其发光度RLU，蛋白酶K消化荧光素酶后其活性降低，相应的RLU会降低，因此可以根据发光度比较蛋白酶K的活性。 实验目的：通过不同品牌的蛋白酶K消化荧光素酶，对两种蛋白酶K的活性做出比较。 实验方法：取10个1.5ml的离心管分为两组，一组为绿邦的重组蛋白酶K，另一组为Sigma公司的蛋白酶K，均加入400ul的荧光素酶，再分别向两组加入1㎎/ml的蛋白酶10ul，20 ul， 30 ul， 40 ul， 50 ul，置于室温15min后用ATP荧光检测仪测RLU，结果如下： K（RLU） SK（RLU） 10 ul 304 1216 20 ul 45 86 30 ul 29 31 40 ul 10 15 50 ul 0 10 注：不加酶K 测该荧光素酶RLU为9999 做出折线图如下： 结果分析：荧光素酶在不加蛋白酶K的情况下，用ATP检测仪测得的RLU为9999，加入绿邦的酶K后为304，加入Sigma公司的酶K为1216，同样的体积同样的荧光素酶，在其他条件都相同的情况下，绿邦的酶K消化后的RLU下降值比Sigma的大，说明绿邦产的酶K活性较好。 实验检测报告二 ：蛋白酶K消化酪蛋白 实验原理： 酪蛋白在A280与A650有紫外吸收峰，由分光光度计测吸光值可检测酪蛋白被酶消化的量，进而比较两种不同品牌蛋白酶K的活性。 实验方法： ⒈配制10㎎∕ml的酪蛋白溶液 ⒉将绿邦公司的蛋白酶K和Sigma公司的蛋白酶K配成1.5㎎∕ml用于检检测实验： ⒊取十个1.5 ml的离心管分为两组，一组为绿邦的酶K（zk），一组为Sigma公司的酶K（sk），分别向离心管中加入以下试剂： 800ul酪蛋白+100ul K+250ul水 800ul酪蛋白+150ul K+200ul水 800ul酪蛋白+200ul K+150ul水 800ul酪蛋白+250ul K+100ul水 800ul酪蛋白+300ul K+50ul水 ⒋室温条件下，吸混匀后的混合液稀释10倍测OD650，结果如下： 0 min(A650) 40min(A650) 80 min(A650) 100ul zk 0.066 0.038 0.026 100ul sk 0.072 0.04 0.032 150ul zk 0.060 0.034 0.025 150ul sk 0.056 0.031 0.035 200ul zk 0.032 0.027 0.025 200ul sk 0.035 0.030 0.025 250ul zk 0.024 0.020 0.016 250ul sk 0.027 0.025 0.020 300ul zk 0.023 0.018 0.016 300ul sk 0.023 0.020 0.018 5.室温条件下，吸混匀后的混合液稀释10倍测OD280，结果如下： 0 min(A280) 40min(A280) 80 min(A280) 100ul zk 1.245 0.736 0.556 100ul sk 1.125 0.727 0.667 150ul zk 1.082 0.625 0.480 150ul sk 0.934 0.612 0.482 200ul zk 0.712 0.543 0.347 200ul sk 0.734 0.523 0.352 250ul zk 0.647 0.482 0.346 250ul sk 0.652 0.500 0.384 300ul zk 0.621 0.435 0.302 300ul sk 0.598 0.412 0.314 通过A280与A650紫外吸收值的不同时间变化比较，发现绿邦的蛋白酶K的消化能力要稍微好于Sigma的蛋白酶K。 分析总结：通过两种实验方法，比较了绿邦蛋白酶K和Sigma的蛋白酶K的活性，发现绿邦的活性要高于Sigma的。