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降血压肽的氨基酸组成及构效关系研究 血管紧张素转换酶包含zn2金属酶，zn2和znm是血管紧张素转换酶活性物质的部位。血管紧张素转换酶抑制肽(降血压肽)能与血管紧张素转换酶活性部位的Zn2+结合,使之失活,从而阻碍血管紧张素转换酶催化水解血管紧张素Ⅰ成为血管紧张素Ⅱ,以及催化水解舒缓激肽成为失活片段的两种生化反应过程,起到降血压的作用。自1965年Ferreira等从美洲茅头蝮蛇的蛇毒中发现第一个降血压肽,现已有数百种降血压肽被发现,其中绝大部分降血压肽是从食品蛋白中通过酶解方法得到,如分别从酪蛋白、猪血红蛋白、鱼蛋白、小麦胚芽蛋白、米渣蛋白以及芝麻蛋白等中通过酶解方法得到降血压肽。 目前国内外学者普遍认为,降血压肽的活性与其自身特征有关。Cheung等认为Trp、Tyr、Phe和Pro在肽链的羧基端以及肽链氨基端有支链脂肪族氨基酸时活性较好。安桂香等认为,对于二肽来说,若N末端为Gly残基,C末端为Tyr、Trp和Pro时,则对血管紧张素转换酶有较强的抑制作用;若C末端为Gly残基时,其N末端为Val、Ile和Arg时对血管紧张素转换酶有较强的抑制作用。也有学者认为降血压肽的N末端一般为长链或具有支链的疏水性氨基酸(如:Leu、Ile和Val等),C末端一般为具有环状结构的芳香族氨基酸或Pro。尽管降血压肽已经研究了近50年之久,然而,降血压肽的结构与活性之间的关系一直没有完全研究清楚。因此,研究降血压肽的构效关系是十分必要的。此外,对已报道的降血压肽特征进行统计分析的研究国内外尚未见报道。通过收集270条不重复降血压肽序列,对N端和C端氨基酸进行特征分析,从中找出基本规律,以研究降血压肽的构效关系,并根据降血压肽的构效关系指导蛋白原料与蛋白酶的选择,为降血压肽的研制生产提供理论指导。 1 材料和方法 1.1 数据来源 分别从以下数据库收集降血压肽: Pir数据库:乔治敦大学医学中心,; 1.2 降血压肽结构变化的研究 从数据库中共收集到270种不同序列的降血压肽。对这些降血压肽的C端和N端氨基酸进行统计和性质分析,根据各氨基酸和相同性质氨基酸在降血压肽的C端和N端的出现频率分析降血压肽的结构特征。 2 结果分析 2.1 降血压肽中氨基酸的降解 对收集的270种降血压肽的N端进行分析研究,结果如图1所示,有7种主要氨基酸在降血压肽的N端出现的频率较高,它们分别为Arg、Tyr、Gly、Val、Ala、Ile和Leu。其中Leu出现频率最高为13.7%。 目前,普遍的观点认为降血压肽的N端大部分为支链脂肪族氨基酸,这与试验分析的结果基本一致。然而,通过研究同时发现Arg虽然不是支链脂肪族氨基酸,但其在降血压肽的N端出现的频率较高。近年来,许多具有N端Arg的高活性降血压肽被发现,例如Kumada等报道了一种降血压肽Arg-Ser-Phe-Cys-Ala具有极强的降血压活性,并且认为Arg对降压肽Arg-Ser-Phe-Cys-Ala的活性具有决定性作用,是该降血压肽不可缺少的活性部位。Miguel等用胃蛋白酶处理蛋清蛋白,并从中分离出一种降血压肽Arg-Ala-Asp-His-Pro-Phe-Leu,经动物实验证明,该肽对原发性高血压老鼠具有显著的降血压效果。综上所述,降血压肽的N端氨酸主要为Arg、Tyr、Gly、Val、Ala、Ile和Leu。同时,从图1中也发现Gln、Thr、Pro、Cys和Trp在降血压肽的N端出现频率很低,甚至有些氨基酸在收集的降血压肽的N端未出现过。说明这些氨基酸在肽链的N端时,其降血压活性可能不高。 2.2 c端氨基酸的降解 Cushman等提出了血管紧张素转化酶模型,并根据模型合成出降血压药物卡托普利,在该模型中,他们认为ACE有S1、S1′、S2′三个必须结合部位,S2,S3......Sn等多个辅助部位。必须结合部位是ACE和竞争性抑制剂的主要结合点和定位点。S2′对C端的Pro和Arg结合力强,对Glu则小。20种氨基酸在降血压肽的C端出现的频率见图2。 从图2可以看出,5个氨基酸在降血压肽的C端出现的频率最高,它们分别为Tyr、Pro、Trp、Phe 和 Leu。在这5种氨基酸中,Pro的出现频率最高为23%,其次分别为Tyr (15.2%)、Phe (10.4%)、Leu (10.0%) 和 Trp (8.1%)。说明这些氨基酸在降血压肽的C端时,其降血压活性较好。同时从图2还可以看出,在降血压肽的C端出现的频率最低甚至未出现的氨基酸为Glu、Asp、Asn、Cys、His和Ile,说明这些氨基酸在降血压肽中的作用不大。 以上的分析结果与前人报道的基本一致。例如,Zhao Y.等认为降血压肽的C端有Pro和Phe时,活性较好;Miyoshi等从玉米蛋白水解产物中分离出9个降血压肽,